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技術(shù)文章
多肽的溶解和保存
點(diǎn)擊次數(shù)：1289 發(fā)布時(shí)間：2008-1-17
建議先用少量肽來(lái)試驗(yàn)zui適溶解方法，只有當(dāng)多肽*溶解后，才能加入溶液并將之稀釋至zui終濃度。即先溶解，后加入緩沖液。注意：總是將多肽加入到適當(dāng)溶劑中攪拌，而不能采用其它方式。 | | |
| 凍干多肽的溶解 | ||
多肽溶解中的主要問(wèn)題是二級(jí)結(jié)構(gòu)的形成。 雖然疏水肽鏈二級(jí)結(jié)構(gòu)的形成更明顯，但除了zui短的肽鏈外，該現(xiàn)象發(fā)生在幾乎所有肽鏈，與極性無(wú)關(guān)。因此，溶解多肽的*個(gè)原則是用無(wú)菌的蒸餾水或去離子水（如果條件允許則用無(wú)氧水）。 多肽溶液可能遇到細(xì)菌降解。為避免該現(xiàn)象的發(fā)生，多肽應(yīng)溶解在無(wú)菌的蒸餾水中，或者用0.45或0.2µm孔徑的濾膜過(guò)濾除菌。 包含Cys、Met、Trp的多肽特別容易氧化，因此應(yīng)該溶于無(wú)氧的水中。無(wú)氧水可以通過(guò)注入惰性氣體（氮、氦、氬）減壓除氣得到。 若多肽不溶于純水，超聲處理有助于打碎顆粒并增加溶解度。注意：超聲處理會(huì)引起溶液發(fā)熱和多肽降解。 若多肽中包含多個(gè)堿性氨基酸，使用1~10%的乙酸水溶液；對(duì)于疏水性非常強(qiáng)的多肽，則使用50%乙酸。 若多肽中含有大量酸性氨基酸，可用1~10%氨溶液或乙酸乙基嗎啡或重碳酸鹽等揮發(fā)性的堿性緩沖液溶解。pH值在層析前必須調(diào)整。 異丙醇和乙腈能溶解中等大小的肽。若肽要上柱，有機(jī)溶劑的量則必須很少，否則將嚴(yán)重影響滯留時(shí)間。 若多肽因?yàn)楹蠽al、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳烴側(cè)鏈而高度疏水，或?yàn)橹行噪臅r(shí)，DMF或DMSO等膜變性劑的使用，有助于多肽的溶解。 a. 高濃度膜變性劑通過(guò)破壞多肽的二級(jí)結(jié)構(gòu)而助溶。 b. 膜變性劑適于多肽分析液的制備，但可能會(huì)對(duì)其生物活性的研究工作造成干擾。 c. DMF是*變性劑（zui高濃度可達(dá)30%），滴加至多肽溶解。 d. 反相層析時(shí)，DMF將與洗脫液前峰一起流出，依進(jìn)樣量的多少，峰值可能很高。大多數(shù)肽能在大量DMF流出后幾分鐘內(nèi)流出，若肽鏈很小，洗脫太早，多肽的量將降低。 | ||
| 凍干多肽的保存 | ||
所有標(biāo)明“保持凍干"的產(chǎn)物，都必須保存在冰凍條件下，-20℃，若保存在-10℃以下，大多數(shù)肽可維持幾年的活性。 當(dāng)使用冰凍產(chǎn)品時(shí)，開(kāi)蓋之前，瓶或試管應(yīng)在裝有新鮮干燥劑的干燥箱內(nèi)升至室溫。對(duì)于保存于-20℃的產(chǎn)品，這個(gè)過(guò)程需要一小時(shí)或更長(zhǎng)，隨包裝大小而異。否則，當(dāng)瓶打開(kāi)時(shí)，水氣進(jìn)入導(dǎo)致多肽凝縮而降低其穩(wěn)定性。一旦打開(kāi)，應(yīng)迅速稱量完畢，并立即密閉以免潮解，尤其親水肽更應(yīng)注意。 | ||
| 多肽溶液的保存 | ||
多肽溶液比干粉的穩(wěn)定性差很多，為了得到結(jié)果，遵循下列原則： 反復(fù)凍融有損于肽的活性，所以建議分裝成小包裝保存。需要多少解凍多少，用后棄掉剩余物。 溶于pH5~7無(wú)菌的緩沖液中，貯存于-20℃。 包含Cys、Met、Try、Glu、Asp的多肽易于氧化，因此須保存在無(wú)氧化劑的環(huán)境中。 由于細(xì)菌能降解多肽，因此貯存前必須過(guò)濾除菌。 |