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          賽默飛色譜及質(zhì)譜

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          粒細(xì)胞集落刺激因子( granulocyte colony- stimulating factor, G-CSF)是腫瘤病人化療后提升白細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)療法,其中重組人粒細(xì)胞集落刺激因子( recombinant human granulo-cyte colony-stimulating factor, rhG-CSF)已經(jīng)廣 泛應(yīng)用于化療和放療引|起的白細(xì)胞數(shù)減少癥。成熟的內(nèi)源性人粒細(xì)胞集落刺激因子( G-CSF)由174個(gè)氨基酸構(gòu)成,分子量為18-20kDa。利用基因工程技術(shù),Amgen公司在1991年上市了大腸桿菌發(fā)酵的短效版G-CSF非格司亭(Neupogen),2001年 上市了長(zhǎng)效版G-CSF培非格司亭( Pegfilgrastim, Neulasta) 。Neupogen和Neulasta兩者的區(qū)別在于長(zhǎng)效版使用了PEG的修飾技術(shù),使CSF的分子量和體積變大,延長(zhǎng)了半衰期,從而把化療周期內(nèi)的注射次數(shù)從7-10次減少到1次注射,增加了臨床使用的便利。
          PEG修飾使蛋白相鄰電荷態(tài)之間疊加非常嚴(yán)重18.4,為了降低蛋白電荷數(shù),需要在色譜流動(dòng)相中使用三氟乙酸(TFA),取代常用的甲酸(FA),使樣品m/z向高質(zhì)量端移動(dòng),從而減少相鄰電荷態(tài)之間的信號(hào)疊加;在質(zhì)譜中PEG修飾的蛋白會(huì)發(fā)生去PEG化,為了避免此種情況,要在柱后添加三乙基胺( TEA); TEA同時(shí)也可以起到降低蛋白電荷態(tài)的作用問(wèn)。
           

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          賽默飛色譜及質(zhì)譜

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