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針對lgG1抗體中N糖型的定性和定量——LC-FLD、LC-MS/MS不同分析方法的比較

閱讀：490 發(fā)布時(shí)間：2020-06-29

重組單克隆抗體( mAbs)已是日益廣泛使用的治療性蛋白質(zhì)藥物，其中以IgG1和IgG2類型較為常見。其恒定區(qū)的N糖基化在不同的細(xì)胞系、克隆和生產(chǎn)條件之間的差異很大，且具有高度的異質(zhì)性，聚糖結(jié)構(gòu)或不同聚糖類型含量的改變通常影響抗體生物學(xué)活性、穩(wěn)定性、免疫原性和半衰期，是許多治療性抗體的關(guān)鍵質(zhì)量屬性，對控制產(chǎn)品一致性至關(guān)重要。

分析不同寡糖結(jié)構(gòu)和含量的傳統(tǒng)策略為通過PNGase F糖苷內(nèi)切酶將寡糖從抗體中釋放，對糖鏈進(jìn)行標(biāo)記、熒光對其進(jìn)行定性和定量，然而其局限于需要寡糖標(biāo)準(zhǔn)品，且當(dāng)抗體中含有多個(gè)N糖基化位點(diǎn)時(shí)，不能區(qū)分位點(diǎn)的異質(zhì)性，而基于高分辨質(zhì)譜對寡糖及糖肽的定性和定量則能夠解決上述問題，但定量時(shí)需考慮不同離子的離子化效率不同。本文采用LC-MS/MS法對原研l(wèi)gG1抗體藥物的N糖肽及游離寡糖進(jìn)行鑒定和相對定量，同時(shí)與經(jīng)典方法L _C-FL D進(jìn)行定量結(jié)果的比較。

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