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技術(shù)文章

六味地黃丸含量測(cè)定方法

點(diǎn)擊次數(shù)：1621 發(fā)布時(shí)間：2010-1-4

六味地黃丸處方為：熟地黃160g，山茱萸（制）80g，牡丹皮60g，山藥80g，茯苓60g，澤瀉60g。2005版《中國(guó)藥典》采用液相色譜法測(cè)定了山茱萸中馬錢(qián)苷和牡丹皮中丹皮酚的含量。有關(guān)六味地黃丸制劑的含量測(cè)定方法總結(jié)如下。
    一、2005《中國(guó)藥典》六味地黃丸含量測(cè)定項(xiàng)下：
    山茱萸：
    色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以四氫呋喃-乙腈-甲醇-0.05％磷酸溶液（1：8：4：87）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為236nm，柱溫40℃。理論板數(shù)按馬錢(qián)苷峰計(jì)應(yīng)不低于4000。水蜜丸制作的方法

    牡丹皮
    色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（70：30）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為274nm。理論板數(shù)按丹皮酚峰計(jì)應(yīng)不低于3500。
    供試品溶液的制備：取本品水蜜丸或小蜜丸，切碎，取約0.3g，精密稱(chēng)定；或取重量差異檢查項(xiàng)下的大蜜丸，剪碎，取約0.4g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，密塞，稱(chēng)定重量，超聲提取（功率250W ，頻率33kH Z）45分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

    二、以單皮酚為指標(biāo)
    李瑋玲等采用SPE-HPLC法測(cè)定六味地黃丸中丹皮酚的含量。液相色譜儀為Waters 2695；色譜柱為Hypersil ODS（2）柱（205mm×4.6mm, 5μm）；流動(dòng)相為甲醇-2％冰醋酸（55：45）；流速為1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm；柱溫25℃。樣品用甲醇超聲提取后經(jīng)Sep-Pak C18微柱處理，收集第12～14mL流出液。
    仲英等采用薄層掃描測(cè)定了六味地黃丸中丹皮酚的含量，采用日本島津CS- 910 雙波長(zhǎng)薄層掃描儀。層析條件：硅膠G板；展開(kāi)溶劑：環(huán)乙烷-氯仿-無(wú)水乙醇（7：3：1）。薄層掃描條件：反射法鋸齒掃描，波長(zhǎng)λs=274nm,λR= 365nm；掃描速度20mm/min；狹縫1.25×1.25mm；Sx=3。樣品用無(wú)水乙醇回流提取。
    汪顯陽(yáng)等用差示光譜法測(cè)定六味地黃丸中丹皮酚的含量，采用島津UV 2240 分光光度計(jì), 751G 分光光度計(jì)。樣品用乙醇浸出提取, 缺丹皮酚樣品為空白樣品。以蒸餾水和0.01mol/L氫氧化鈉溶液分別定容,選擇352nm為測(cè)定波長(zhǎng),370nm為參比波長(zhǎng)。
    趙新峰等用膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法分離測(cè)定中藥材牡丹皮及中成藥六味地黃丸中丹皮酚的含量。定量采用內(nèi)標(biāo)法,選取蘆丁為內(nèi)標(biāo)。Unimicro 毛細(xì)管電泳儀（美國(guó)Hyperquan.Inc 公司）。所用毛細(xì)管規(guī)格為55cm（有效長(zhǎng)度50cm）×75μm,檢測(cè)波長(zhǎng)274nm,電壓15 kV ,背景電解質(zhì)分別為30mmol/L SDS-30 mmol/ L硼砂,20mmol/ LSDS-50mmol/ L硼砂（pH9.4）。供試品溶液的配制：牡丹皮藥材加95％乙醇超聲提??；六味地黃丸粉碎后,與5g硅藻土（色譜載體,40～60目）混研,研勻,烘干,無(wú)水乙醇超聲提取。
    宋麗麗等用近紅外光譜法測(cè)定六味地黃丸中丹皮酚，分別采用偏zui小二乘（PLS）、主成分分析-BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)、小波變換-BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)對(duì)所采集的樣本數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。
    完茂林等測(cè)定六味地黃丸中丹皮酚的含量，采用毛細(xì)管氣相色譜法,以正十六烷為內(nèi)標(biāo)。日本島津GC-9A氣相色譜儀；色譜柱為熔融彈性毛細(xì)管柱（28m×0. 28mm ,5μm）,涂布SE-30 0.26μm, N2 流速60ml/min, H2流速50ml/min,空氣流速500ml/min,柱溫180℃,汽化器、檢測(cè)器320℃。樣品制備：六味地黃丸研細(xì)用乙醇超聲處理后用中性氧化鋁柱（100～200 目,10 g,φ11mm）處理，收集乙醇洗脫液，濃縮并定容。      六味地黃丸如何制成的

    三、以齊墩果酸或熊果酸為指標(biāo)
    馮燕芹等測(cè)定六味地黃丸（濃縮丸）中熊果酸的含量，采用HPLC法。色譜柱為ALLTIMA C18 5μ；流動(dòng)相為甲醇-水（80：20）；流速為0.5mL/min；ELSD檢測(cè)器漂移管溫度：80℃。樣品用乙醚回流提取。
    丁晴等測(cè)定六味地黃丸及六味地黃膠囊中齊墩果酸、熊果酸的含量，采用HPLC法。液相色譜儀為島津LC-10AD；色譜柱為Shim-Pack C18分析柱（4.6mm×150mm,5μm）；流動(dòng)相為乙腈-甲醇-水-乙酸胺（ 70：16：14：0.5）；流速1mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)215nm；柱溫為室溫。樣品處理方法：六味地黃丸（濃縮丸）用水溶解并過(guò)濾后，用乙醚加熱回流提取，殘?jiān)檬兔眩?/font>30～60℃）浸泡，棄去石油醚液，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ荨?/span>

四、以馬錢(qián)素為指標(biāo)
陳賀新等測(cè)定六味地黃丸中馬錢(qián)素的含量，采用RP-HPLC法。液相色譜儀為Waters 510；色譜柱為YWG-C18柱（150mm×4.6mm,5μm）；流動(dòng)相為甲醇-水（1：4）；流速為0.8mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為238nm。樣品用甲醇超聲提取。

    五、多糖、梓醇等
    汪顯陽(yáng)等采用苯酚硫酸法測(cè)定了六味地黃丸中多糖的含量。供試品溶液的制備：精密稱(chēng)取1g六味地黃丸粉末，加80％乙醇加熱回流提取，過(guò)濾，殘?jiān)?/font>80％熱乙醇洗滌，再用蒸餾水洗滌，熱蒸餾水洗滌，合并水濾液用蒸餾水定容。
    劉長(zhǎng)河等用薄層掃描法測(cè)定了六味地黃丸中梓醇的含量，薄層條件：硅膠G板，展開(kāi)劑為氯仿-甲醇-水（7：3：0.5）；碘蒸汽顯色。薄層掃描條件：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)反射鋸齒掃描，掃描波長(zhǎng)為350nm，狹縫1.2mm×1.2mm，Sx=3。
    六味地黃丸用80％乙醇超聲處理后，經(jīng)D101型大孔吸附樹(shù)脂純化：先以水50ml洗脫，棄去；以20％甲醇50ml洗脫，合并洗脫液，濃縮并定容。六味地黃丸制作設(shè)備
    趙新峰等測(cè)定中藥材山茱萸及中成藥六味地黃丸中沒(méi)食子酸的含量，采用毛細(xì)管區(qū)帶電泳法，選取肉桂酸為內(nèi)標(biāo)。所用毛細(xì)管規(guī)格為60cm（有效長(zhǎng)度45cm）×75μm,檢測(cè)波長(zhǎng)271nm ,電壓20kV,背景電解質(zhì)為20mmol/ L硼砂，重力進(jìn)樣（10cm×5s），電泳溫度20℃,每次運(yùn)行前依次用0.1mol/ LNaOH溶液、去離子水、電泳緩沖溶液沖洗3min。六味地黃丸用95％乙醇超聲處理。

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