AAT Bioquest  22903  Cell Meter™ 熒光細胞內(nèi)總 ROS 活性檢測試劑盒*深紅熒光*

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AAT Bioquest 熒光細胞內(nèi)總ROS活性試劑盒產(chǎn)品簡介：

美國 AAT Bioquest Inc.(前身是 ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學(xué)研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學(xué)家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。AATBioquest 的產(chǎn)品幫助 quan shi jie 的科學(xué)家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學(xué)，免疫學(xué)，細胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域。AAT Bioquest 會不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個領(lǐng)域的產(chǎn)品。

AAT Bioquest  22903  Cell Meter™ 熒光細胞內(nèi)總 ROS 活性檢測試劑盒*深紅熒光* 200Tests

產(chǎn)品品牌：AAT Bioquest

產(chǎn)品貨號：22903

產(chǎn)品名稱：Cell Meter™ 熒光細胞內(nèi)總 ROS 活性檢測試劑盒*深紅熒光*

產(chǎn)品規(guī)格：200 Tests

AAT Bioquest 熒光細胞內(nèi)總ROS活性試劑盒產(chǎn)品說明：

AAT Bioquest  22903  Cell Meter™ 熒光細胞內(nèi)總 ROS 活性檢測試劑盒*深紅熒光* 200Tests。

活性氧（ROS）是氧正常代謝的天然副產(chǎn)物，在細胞信號傳導(dǎo)中起重要作用。ROS的積累導(dǎo)致細胞結(jié)構(gòu)的嚴重損害。氧化應(yīng)激在心血管疾病，糖尿病，骨質(zhì)疏松癥，中風(fēng)，炎癥性疾病，許多神經(jīng)退行性疾病和癌癥中的作用已經(jīng)得到很好的確立。ROS測量將有助于確定氧化應(yīng)激如何調(diào)節(jié)不同的細胞內(nèi)途徑。細胞計™熒光法細胞內(nèi)總ROS活性檢測試劑盒使用我們專有的ROS Brite™ 670傳感器來量化活細胞中的ROS。細胞滲透性和非熒光 ROS Brite™ 670 在與 ROS 反應(yīng)時表現(xiàn)出強烈的熒光信號。ROS Brite™ 670傳感器位于細胞質(zhì)中。ROS Brite™ 670傳感器的熒光信號可以通過熒光顯微鏡、高內(nèi)涵成像、微孔板熒光或流式細胞術(shù)進行測量。細胞計™熒光法細胞內(nèi)總 ROS 活性測定試劑盒提供了一種靈敏的一步熒光測定，可在孵育 1 小時內(nèi)檢測活細胞中的細胞內(nèi) ROS（尤其是超氧化物和羥基自由基）。該測定可以使用熒光酶標儀或帶Cy96濾光片的熒光顯微鏡以方便的384孔或5孔微量滴定板形式進行。

組件

組件A：ROS Brite™ 670—1瓶

組分B：檢測緩沖液—1 瓶 （20 mL）

組件C：DMSO—1 瓶 （100 μL）

方案A摘要（熒光酶標儀，熒光顯微鏡）

1.    在生長培養(yǎng)基中制備細胞

2.    用測試化合物處理細胞以誘導(dǎo)ROS

3.    添加 ROS Brite™ 670 工作溶液（100 孔板為 96 μL/孔，25 孔板為 384 μL/孔）

4.    將細胞在37°C下染色30 - 60分鐘

5.    在Ex/Em= 650/675 nm（截止= 665 nm）或使用Cy5濾光片組監(jiān)測熒光顯微鏡時的熒光增加（底部讀數(shù)模式）

方案B摘要（流式細胞儀）

1.    在生長培養(yǎng)基中制備細胞

2.    用測試化合物處理細胞以誘導(dǎo)ROS

3.    將 ROS Brite™ 670 與細胞一起孵育 30 - 60 分鐘

4.    使用帶APC通道的流式細胞儀監(jiān)測熒光強度

重要事項 在開始實驗之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分

儲備液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

ROS Brite™ 670 儲備液 （500X）

將 40 μL DMSO（組分 C）加入 ROS Brite™ 670（組分 A）小瓶中，充分混合制成 500X ROS Brite™ 670 儲備溶液。避光。

注意 20 μL 的 500X ROS Brite™ 670 儲備溶液足以用于 1 個板。對于流式細胞儀，為方便起見，500X ROS Brite™ 670儲備溶液可在DMSO中通過5個文件夾稀釋至100X。儲存時，請密封管子。

工作溶液的制備

將 20 μL 500X ROS Brite 670 儲備溶液加入 10 mL 檢測緩沖液（組分 B）中，充分混合制成 ROS Brite™™ 670 工作溶液。

注意 此ROS Brite™ 670工作溶液在室溫下可穩(wěn)定保存至少2小時。

實驗方案樣本

對于協(xié)議 A：

1.    在所需的緩沖液（如PBS或HHBS）中用10 μL 10X測試化合物（96孔板）或5 μL 5X測試化合物（384孔板）處理細胞。對于對照孔（未處理的細胞），加入相應(yīng)量的復(fù)合緩沖液。

2.    為了誘導(dǎo)ROS，在室溫或5%CO中孵育細胞板2，37°C培養(yǎng)箱所需時間（例如：用30μM叔丁基過氧化*（TBHP）處理Hela細胞100分鐘）。

3.    向細胞板中加入 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）的 ROS Brite™ 670 工作溶液。

4.    將細胞在 5% CO 中孵育2，37°C培養(yǎng)箱30分鐘至60分鐘。

5.    用熒光酶標儀（底部讀取模式）在Ex / Em = 650 / 675 nm（截止= 665 nm）下監(jiān)測熒光增加，或使用帶有Cy5濾光片組的熒光顯微鏡觀察細胞。

對于協(xié)議 B：

1.    制備密度為 5 × 10 的細胞⁵至 1 × 10⁶細胞/毫升。注意：應(yīng)單獨評估每個細胞系，以確定誘導(dǎo)細胞凋亡的最佳細胞密度。

2.    在所需的緩沖液（如PBS或HHBS）中用測試化合物處理細胞。對于對照孔（未處理的細胞），加入相應(yīng)量的復(fù)合緩沖液。

3.    為了誘導(dǎo)ROS，在室溫或5%CO中孵育細胞板2，37°C培養(yǎng)箱至少30分鐘或所需時間（用30μM叔丁基過氧化*（TBHP）處理的Hela細胞為100分鐘）。

4.    將 1 μL/mL 細胞的 500X ROS Brite 670 儲備溶液或 5 μL/mL 細胞的 100X ROS Brite™™ 670 儲備溶液添加到細胞培養(yǎng)基中。

5.    將細胞在 5% CO 中孵育2，37°C培養(yǎng)箱30至60分鐘。

6.    使用具有APC通道的流式細胞儀監(jiān)測熒光強度。

產(chǎn)品訂購信息：

22903  Cell Meter™ 熒光細胞內(nèi)總 ROS 活性檢測試劑盒*深紅熒光* 200Tests