目錄:上海雅吉生物科技有限公司>>常規(guī)試劑>>試劑>> A3824-05HotStart Bst 4.2 Basic Mix(可凍干)試劑
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 200Tx25μl |
---|---|---|---|
貨號(hào) | A3824-05 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合 |
主要用途 | 科研實(shí)驗(yàn) |
HotStart Bst 4.2 Basic Mix(可凍干)試劑為濃度 3.125x 的濃縮
試劑,包含了 Helicaser、dNTP、Mg
2+、反應(yīng)緩沖鹽、凍
干賦形劑和穩(wěn)定劑。HotStart Bst4.2 DNA/RNA 聚合酶為
單獨(dú)的組分。本品針對(duì)于具有凍干經(jīng)驗(yàn)的研究者,直接進(jìn)
行后續(xù)凍干,無需再加入任何其它輔料。
Bst4.2 具有以下性能:(1)Bst 4.2 全系包含熱啟動(dòng)
Aptamer,該配體確保酶在<30℃時(shí),酶活封閉效率>95%,
在>60℃時(shí) 1min 內(nèi)釋放酶活。該特性利于室溫建立
反應(yīng)體系,并大幅降低了低溫條件下的非特異擴(kuò)增;(2)
反應(yīng)溫度提升到 70℃,大幅降低引物 Dimer 的形成,提
高擴(kuò)增特異性,并使得粗樣品核酸釋放更加充分;(3)全
系包含 Helicaser,因此,允許在不使用 F3/B3 引物的情
況下進(jìn)行 LAMP 擴(kuò)增(easy LAMP),并允許 FIP/BIP 的
引物用量降低一倍。這將進(jìn)一步降低非特異擴(kuò)增,并使得
擴(kuò)增均一性大幅提升。
本品為多用途的試劑,適用于 LAMP 進(jìn)行 Molecular
Beacon 探針、DP-LAMP 探針、試紙條等檢測(cè)。
名 稱 200T
3.125xBst4.2 Basic Mix(可凍干) 1.6 ml
HotStart Bst 4.2 (16U/μl) 100 μl
儲(chǔ)存:長期保存請(qǐng)置于-20℃以下(18 個(gè)月有效);制品反復(fù)凍融
10 次不影響性能,但應(yīng)避免反復(fù)凍融;制品由于含有高濃度的糖
組分,-20℃保存的制品,在融化時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶物。此時(shí)
3.125xBst4.2 Basic Mix 可在 37℃進(jìn)行融化,而 Bst4.2 酶制
品在 30℃的溫度下融化,過高的溫度可能會(huì)導(dǎo)致熱啟動(dòng)性能下降。
一經(jīng)融化推薦置于 2-8℃保存,在此條件下制品穩(wěn)定儲(chǔ)存 1 個(gè)月。
特殊說明:
(1) Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 在用于 LAMP 擴(kuò)增時(shí)的推薦
反應(yīng)溫度為 70℃,最佳反應(yīng)溫度為 70℃。
(2) 制品中包含高濃度的鹽組分,使用時(shí)做好個(gè)人防護(hù),防止制
品與皮膚、眼、鼻、呼吸道等接觸和吸入,一旦接觸或吸入,請(qǐng)用
大量的清水沖洗。
(3)防止氣溶膠污染,盡可能進(jìn)行分區(qū)操作。
1. 10xLAMP Primer Mix 的配制
標(biāo)準(zhǔn) LAMP eLAMP
FIP/BIP 16 µM each 8~16 µM each
LF/LB 4~8 µM each 4~8 µM each
F3/B3 2 µM each 非必須
注意:eLAMP(easy LAMP)為去除 F3/B3 引物的方法,
為 Bst4.2-3.2 系列專用的使用策略,對(duì)于大多數(shù)引物組,
在 Helicaser 的加持下,擴(kuò)增速度幾乎不受影響。
2. 配制 LAMP 反應(yīng)體系
3.125xBst4.2 Basic Mix 8 μl
10x Primer Mix 2.5 μl
HotStart Bst 4.2(16U/μl) 0.5 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到總體積 25 μl
反應(yīng)體系配好后,置于 70°C 反應(yīng) 20~40min。
3. 試劑的凍干反應(yīng)(僅限專業(yè)人員)
本試劑可供具有凍干經(jīng)驗(yàn)的人員直接進(jìn)行后續(xù)凍干,試劑的配方對(duì)
凍干條件不苛刻。但對(duì)于不同的用戶來講,由于凍干形式、凍干體
積、上機(jī)量、凍干容器、凍干磨具等因素存在差異,以下程序僅供
參考。進(jìn)一步的程序優(yōu)化均需根據(jù)具體情況自行調(diào)整。對(duì)于非專業(yè)
人員來講,請(qǐng)直接采購 HaiGene 的凍干制品,或委托訂制。
3.125xBst4.2 Basic Mix 8 μl
25xPrimer Mix 1 μl
HotStart Bst 4.2(16U/μl) 0.5 μl
ddH2O 到總體積 9.5-10 μl
制品成型后的凍干程序:
-50℃預(yù)凍 10min; -50℃ 4-8h(真空段);-50℃升溫到 25℃(每
小時(shí)升溫 5℃);25℃ 2h; 25℃恒溫。
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