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更新時(shí)間:2024-10-21 09:13:11瀏覽次數(shù):122評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | T25瓶/2冷凍管 |
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貨號(hào) | YS106C | 主要用途 | 科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞名稱:Eca-109人食管癌細(xì)胞ATCC
細(xì)胞代次:P4
細(xì)胞規(guī)格:T25瓶(包郵)/2冷凍管(需加干冰運(yùn)輸費(fèi))
細(xì)胞凍存:無血清凍存液
細(xì)胞傳代:第一次建議1:2
細(xì)胞收到后處理
培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的最好辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個(gè)細(xì)胞瓶,消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)嚴(yán)格無菌操作,將細(xì)胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存(最好40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售后依據(jù),不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。(注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時(shí)要將蓋子擰松,傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基,以便進(jìn)行對(duì)比培養(yǎng))
培養(yǎng)步驟
細(xì)胞傳代:如果未超過80%匯合度時(shí),將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);如果細(xì)胞密度超80%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),傳代具體步驟如下細(xì)胞傳代:
A1、對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
A2、懸浮細(xì)胞凍存:
1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),將T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm
離心5min;
2、棄上清,沉淀細(xì)胞加入1ml/支的雅吉生物無血清凍存液(C7001),混勻后加入凍存管中。(如:凍一支,加入 1ml 無血清凍存液即可)
3、將凍存細(xì)胞直接放入-80℃冰箱即可;如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,需在-80℃冰箱存
放 24 小時(shí)以上。
B1、對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考如下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 添加0.25%消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基重懸。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2的比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個(gè)T25瓶),補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,最后放入到37℃、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
B2、貼壁細(xì)胞凍存:
1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;
3、 棄上清,沉淀細(xì)胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號(hào):C7001),混勻后加入凍存管中。
細(xì)胞復(fù)蘇:
1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護(hù)面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4、第二天,換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
注意事項(xiàng):有些細(xì)胞比較特殊,如貼壁不牢,在運(yùn)輸過程中發(fā)生容易細(xì)胞脫落,這是正常現(xiàn)象。請(qǐng)將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管,1000rpm離心5min,收集上清作過渡培養(yǎng)(后期對(duì)比培養(yǎng)),沉淀加入消化液1-2ml,輕輕吹打,重懸,消化1-2分鐘后,加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個(gè)T25),補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,最后放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒:MTT比色法是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法,MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測(cè),MTT檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色Formazan并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無此功能,在特定溶劑存在的情況下可以被溶解,然后通過酶標(biāo)儀可以測(cè)定570nm波長(zhǎng)附近的吸光度,細(xì)胞增殖越多越快,則吸光度越高;細(xì)胞毒性越大,則吸光度越低。該產(chǎn)品檢測(cè)本底低,靈敏度高,線性范圍寬。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。
YS101CDU-145人前列腺癌細(xì)胞
YS102CHUVEC和A549融合株EA.hy926
YS103CEAC小鼠艾氏腹水癌細(xì)胞
YS104CEC-304人血管內(nèi)皮細(xì)胞
YS105CEC9706人食管癌細(xì)胞
YS106CEca-109人食管癌細(xì)胞
YS107CEJ人膀胱癌細(xì)胞
YS108CEL4小鼠淋巴瘤細(xì)胞
YS109C小鼠乳腺癌EMT-6
YS110CES-2癌細(xì)胞人卵巢透明細(xì)胞
YS111CFaDu人咽鱗癌細(xì)胞
YS112CGBC-SD人膽囊癌細(xì)胞
YS113CGES-1人胃粘膜細(xì)胞
YS114C肺腺癌GLC-82
YS115CNCI-H1299人肺腺癌細(xì)胞
YS116CH22小鼠肝癌細(xì)胞
YS117CH9c2(2-1)大鼠心肌細(xì)胞
YS118CHaCaT人正常皮膚細(xì)胞
YS119CHAL-01人急性混合型白血病細(xì)胞
YS120CHBZY-1大鼠腎內(nèi)膜細(xì)胞
YS121CHCC1937人乳腺癌細(xì)胞
YS122CHCC827肺癌細(xì)胞人非小細(xì)胞
YS123C肝癌HCC-9204
YS124CHCCLM3人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞
YS125C低分化結(jié)腸腺癌HCT-116
YS126CHCT-15人結(jié)腸癌細(xì)胞
YS127CHCT-8人結(jié)腸癌細(xì)胞
YS128CHEC-1-A人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞
YS129CHEC-1-B人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞
YS130CHEL白血病細(xì)胞人紅白細(xì)胞
YS131CHeLa人宮頸癌細(xì)胞
YS132C宮頸癌HelaS3
YS133CHELF人胚肺成纖維細(xì)胞
YS134CHep3B2.1-7人肝癌細(xì)胞
YS136C肝癌Hep3B
YS137CHepG2人肝癌細(xì)胞
YS138CHES人胚皮膚成纖維樣細(xì)胞
YS139C(未分化)HGC-27人胃癌細(xì)胞
YS140CHK-2人腎近曲小管上皮細(xì)胞
YS141CHL-60人白血病細(xì)胞
YS142CHO-8910人卵巢癌細(xì)胞
YS143CHO-8910PM人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞
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