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應(yīng)該如何避免在PCR實驗中管子變型？
閱讀：9587 發(fā)布時間：2017-3-17共計923字 | 建議閱讀時間 6 分鐘
首先，倒置管子變性的罪魁禍首是PCR儀的熱蓋，熱蓋的作用是為了防止PCR反應(yīng)過程中反應(yīng)液的蒸發(fā)，水汽在管蓋上凝結(jié)。
早期的PCR儀沒有熱蓋，PCR加熱過程中反應(yīng)液蒸發(fā)形成水汽在管蓋上凝結(jié)，導(dǎo)致PCR反應(yīng)體系隨著循環(huán)的進行不斷減少，影響PCR反應(yīng)的正常進行。為了防止PCR反應(yīng)液的蒸發(fā)，會在配置好的PCR反應(yīng)液中加入石蠟油或礦物油。但是反應(yīng)結(jié)束以后，石蠟油不好清除趕干凈，對接下來的步驟有所影響。
后來出現(xiàn)了帶熱蓋的PCR儀，熱蓋的作用并不是防止蒸發(fā)，而是防止蒸發(fā)的水汽在管上凝結(jié)。因為管蓋頂部有熱源加熱使管體內(nèi)的蒸汽形成循環(huán)，所以反應(yīng)液蒸發(fā)后的水汽不會在管蓋上凝結(jié)。
市面上大家目前接觸比較多的是可調(diào)式熱蓋，即熱蓋的高度可以手動調(diào)節(jié)，適用于各種PCR管，如高管和矮管。但是高度調(diào)節(jié)的壓力是通過使用者來感覺的。
沒壓嚴實，導(dǎo)致熱蓋未發(fā)揮功能，反應(yīng)體系減少，壓得過頭了，壓力導(dǎo)致管體型變。
后來有了力矩式可調(diào)熱蓋
即熱蓋旋轉(zhuǎn)到一定力矩后內(nèi)置機構(gòu)打滑，從而既保證了熱蓋壓力，又防止了過度導(dǎo)致的變型。
但是還是需要注意的是，這類熱蓋使用結(jié)束后需要擰松熱蓋，否則下一個用戶如果直接下壓熱蓋，可能造成PCR管變型。
很多使用者會忘記松熱蓋。所以日常操作中不論是操作配置什么熱蓋的儀器，我們要養(yǎng)成習(xí)慣，除了使用后擰松熱蓋再取樣本，同時在使用PCR儀器前習(xí)慣性地擰松熱蓋，預(yù)防上一位操作者未松熱蓋。
實際工作中，按照了以上良好的習(xí)慣去操作，為何還會出現(xiàn)管子變型的問題？？？
答 案
使用孔太少，壓力不均導(dǎo)致的。以96孔為例，實驗中，如果使用了16個以上的模塊孔（具體的操作因人而異，同時也和放置的位置有關(guān)），實驗的管子不會變型。
如果只用幾個模塊孔，反應(yīng)的幾個樣本管，而且放在模塊中央或者中央偏一點的位置，就很容易發(fā)生管子變型的情況。解決這一問題的辦法其實也很好辦。
如果這一批實驗需要用到的模塊孔很少，只有幾個，那可以在模塊孔zui邊緣的四個角分別放4個空管（加不加水隨意，目的只是為了平衡熱蓋下壓的壓力）。這樣就可以解決擴增少量樣本出現(xiàn)的管子變型的情況。
以上是對PCR實驗中經(jīng)常遇到的管子融化、變型問題的探討，希望對您有幫助。