小鼠結(jié)腸類器官培養(yǎng)試劑盒
MCE 國際站：Mouse Colonic Organoid Kit
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：Basal Medium A : 4℃, 1 year. Shipping with blue ice.Supplement B (50x) & Supplement C (250x) & Supplement D (250x) : -20°C, 1 year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. Shipping with dry ice.Supplement E : Room temperature, 60 months. Shipping with blue ice.
簡介：MCE 小鼠結(jié)腸類器官培養(yǎng)試劑盒包含小腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A，培養(yǎng)添加物 B (50x)，培養(yǎng)添加物 C (250x)，培養(yǎng)添加物 D (250x) 以及 EDTA。該產(chǎn)品可有效構(gòu)建小鼠小腸類器官。
概述：MCE 小鼠結(jié)腸類器官培養(yǎng)試劑盒包含結(jié)腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A、培養(yǎng)添加物 B (50x)，培養(yǎng)添加物 C (250x)、培養(yǎng)添加物 D (250x) 以及 EDTA。該產(chǎn)品可用于有效構(gòu)建小鼠結(jié)腸類器官。腸道隱窩底部存在的干細胞及其祖細胞具有自我更新和分化成各種腸道細胞類型的能力，以確保類器官的持續(xù)生長和維持，模擬真實結(jié)腸組織的特征。小鼠結(jié)腸類器官對于研究結(jié)腸發(fā)育、疾病機制和藥物篩選具有重要意義。
描述：
• MCE小鼠結(jié)腸類器官試劑盒含有結(jié)腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基A、結(jié)腸類器官補充劑B（50x）、結(jié)腸類器官補充劑C（250x）、結(jié)腸類器官補充劑D（250x）和EDTA。本產(chǎn)品可用于高效構(gòu)建小鼠結(jié)腸類器官。
• 源自原發(fā)組織的結(jié)腸類器官具有自我更新能力，可模仿真實結(jié)腸組織的特征。小鼠結(jié)腸類器官可用于研究結(jié)腸發(fā)育、疾病機制和藥物篩選。
操作說明：1. 配制小鼠結(jié)腸類器官培養(yǎng)基冰上解凍小鼠結(jié)腸類器官培養(yǎng)添加物 B、小鼠結(jié)腸類器官培養(yǎng)添加物 C、小鼠結(jié)腸類器官培養(yǎng)添加物 D，按下列組分配制小鼠結(jié)腸類器官培養(yǎng)基，充分混勻后置于冰上備用。a. 配制小鼠結(jié)腸類器官擴增培養(yǎng)基b. 配制小鼠結(jié)腸類器官分化培養(yǎng)基2. 提取原代組織細胞a. 使用預(yù)冷的原代組織儲存液浸泡新鮮提取的原代小鼠結(jié)腸組織，并置于 4°C 冰箱中暫時保存。b. 在保證無菌條件下，使用小鼠結(jié)腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 或者 PBS 沖洗已去除脂肪或肌肉等非上皮組織成分后的原代小鼠結(jié)腸組織，然后在細胞培養(yǎng)皿中用無菌剪刀將其切成盡可能小的直徑約為 2 mm 的碎片，隨后轉(zhuǎn)移至含 15 mL 錐形管中。c. 加入 10 mL 預(yù)冷的 2 mM EDTA-PBS，4°C 孵育 30 分鐘。d. 孵育完成后，讓組織片沉淀到管底，吸去上清。加入10 mL 預(yù)冷 PBS 清洗一遍。此步驟也可將組織碎片轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿中用 PBS 清洗 2 次，去除 EDTA。e. 在含有預(yù)冷 PBS 的培養(yǎng)皿或者 50 mL 離心管中，用 5 mL 的移液管用力吹打破碎組織，釋放隱窩，取 10 uL 通過顯微鏡觀察確認已分離出大量腸隱窩。f. 使用 70 μm 的濾網(wǎng)過濾，收集濾液。4°C 300 g 離心 3 分鐘，棄上清。g. 加入 1 mL PBS 重懸，取 20 μL 懸液進行鏡檢和隱窩計數(shù)，計數(shù)后收集重懸液 4°C 300 g 離心 3 分鐘，棄上清后置于冰上待用。3. 構(gòu)建類器官a. 在冰上將收集的隱窩重懸于基質(zhì)膠中，推薦重懸密度為每 10 μL 包含 20-120 個隱窩。重懸后盡快進行鋪板。建議使用基質(zhì)膠原液重懸腫瘤細胞，如需稀釋，請確保基質(zhì)膠體積與稀釋所用的類器官培養(yǎng)基體積的比例高于 2:1。b. 將混懸液迅速注入 24 孔細胞培養(yǎng)板的底部，盡量避免產(chǎn)生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液。隨后將細胞培養(yǎng)板放入 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中孵育 15-25分鐘進行固化。c. 待基質(zhì)膠凝固后，在每個孔邊緣緩慢注入 500 μL 小鼠結(jié)腸類器官擴增培養(yǎng)基，避免破壞已有的凝膠結(jié)構(gòu)。然后將細胞培養(yǎng)板放回 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中。d. 密切關(guān)注類器官生長狀態(tài)，每隔 3 天更換一次培養(yǎng)基。一般情況下，5-7 天可觀察到小鼠結(jié)腸類器官生成。4. 類器官傳代a. 吸去上層培養(yǎng)基，向孔中加入 500 μL 預(yù)冷小鼠結(jié)腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A，用潤洗過的移液器吹打?qū)⒓毎囵B(yǎng)孔內(nèi)容物剝離出培養(yǎng)板并轉(zhuǎn)移至 1.5 mL EP 管內(nèi)。b. 使用移液槍充分吹打混勻至類器官與基質(zhì)膠分離，250-300 g 離心 3 分鐘收集沉淀。c. 加入適量的類器官消化液置于 37°C 培養(yǎng)箱中充分消化 2 分鐘后加入 1 mL 小鼠結(jié)腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 終止消化。d. 4°C 250-300 g 離心 3 分鐘收集沉淀，加入1 mL 小鼠結(jié)腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 重懸。e. 4°C 250-300 g 離心 3 分鐘收集沉淀，置于冰上待用。f. 在冰上將收集的隱窩重懸于基質(zhì)膠中，盡快進行鋪板。建議使用基質(zhì)膠原液重懸腫瘤細胞，如需稀釋，建議使用基質(zhì)膠原液重懸腫瘤細胞，如需稀釋，請確保基質(zhì)膠體積與稀釋所用的類器官培養(yǎng)基體積的比例高于 2:1。g. 將混懸液迅速注入 24 孔細胞培養(yǎng)板的底部，盡量避免產(chǎn)生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液。隨后將細胞培養(yǎng)板放入 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中孵育 15-25 分鐘進行固化。h. 待基質(zhì)膠凝固后，在每個孔邊緣緩慢注入 500 μL 預(yù)熱的小鼠結(jié)腸類器官擴增培養(yǎng)基，避免破壞已有的凝膠結(jié)構(gòu)，然后將細胞培養(yǎng)板放回 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中。i. 密切關(guān)注結(jié)腸類器官的生長狀態(tài)，當類器官的直徑超過 100 μm 后，吸去小鼠結(jié)腸類器官擴增培養(yǎng)基，并加入 500 μL 小鼠結(jié)腸類器官分化培養(yǎng)基，每 2 天更換一次分化培養(yǎng)基。j. 密切關(guān)注結(jié)腸類器官的生長狀態(tài)，通常分化需要至少 4 天，分化的類器官可進行后續(xù)實驗
注意事項：1. 配制后的培養(yǎng)基不建議在 4°C 冰箱中放置超過 2 周。2. 提取原代組織細胞時需保持全程無菌，避免造成后續(xù)實驗污染。3. 基質(zhì)膠操作需全程保持低溫避免凝膠，與細胞重懸后應(yīng)將其迅速注入細胞培養(yǎng)孔內(nèi)，盡量避免產(chǎn)生氣泡。4. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作
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