人胃上皮類器官培養(yǎng)試劑盒
MCE 國(guó)際站：Human Gastric Epithelial Organoid Kit
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲(chǔ)條件：Basal Medium A : 4℃, 1 year. Shipping with blue ice.Supplement B (50x) & Supplement C (250x) & Supplement D (250x) : -20°C, 1 year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. Shipping with dry ice.
簡(jiǎn)介：MCE 人胃上皮類器官培養(yǎng)試劑盒包含胃上皮類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 以及培養(yǎng)添加物 B (50x)，培養(yǎng)添加物 C (250x) 和培養(yǎng)添加物 D (250x)。該產(chǎn)品可有效構(gòu)建人胃上皮類器官。
概述：MCE 人胃上皮類器官培養(yǎng)試劑盒包含人胃上皮類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A、培養(yǎng)添加物 B (50x)、培養(yǎng)添加物 C (250x) 和培養(yǎng)添加 D (250x)。該產(chǎn)品可用于有效構(gòu)建人胃上皮類器官。人胃上皮類器官對(duì)研究胃相關(guān)疾病、藥物篩選等具有重要意義。
描述：
• MCE人胃上皮類器官試劑盒含有人胃上皮類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基A、人胃上皮類器官添加物B（50x）、人胃上皮類器官添加物C（250x）和人胃上皮類器官添加物D（250x）。本產(chǎn)品可用于高效構(gòu)建人胃上皮類器官。
• 人胃上皮類器官可為研究胃相關(guān)疾病、藥物篩選等提供有用的模型。
操作說明：1. 配制人胃上皮類器官培養(yǎng)基冰上解凍人胃上皮類器官培養(yǎng)添加物 B、人胃上皮類器官培養(yǎng)添加物 C、人胃上皮類器官培養(yǎng)添加物 D，按下列組分配制人胃上皮類器官培養(yǎng)基，充分混勻后置于冰上備用。a. 按下列組分配制人胃上皮類器官擴(kuò)增培養(yǎng)基，充分混勻后置于冰上備用。b. 按下列組分配制人胃上皮類器官穩(wěn)態(tài)培養(yǎng)基，專門用于傳代培養(yǎng)。充分混勻后置于冰上備用。2. 提取原代組織細(xì)胞a. 使用預(yù)冷的原代組織儲(chǔ)存液浸泡新鮮提取的原代人胃上皮組織，并置于 4°C 冰箱中暫時(shí)保存。b. 在保證無(wú)菌條件下，使用人胃上皮類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 或者 PBS 沖洗干凈去除脂肪或肌肉等非上皮組織成分后的原代人胃上皮組織，直到上清澄清。然后在細(xì)胞培養(yǎng)皿中用無(wú)菌剪刀將其切成盡可能小的直徑約為約 1-3 mm 的碎片，隨后轉(zhuǎn)移至15 mL 錐形管中。c. 加入適量組織消化液，消化液體積不超過錐形管體積的三分之二。在 37°C 下孵育一段規(guī)定的時(shí)間，一般為 30-60 分鐘，每 5-8 分鐘通過劇烈搖動(dòng)和上下移液，密切關(guān)注消化情況。d. 當(dāng)出現(xiàn)上皮細(xì)胞簇時(shí)，加入終濃度為 2% 的 FBS 停止消化，然后輕輕地吹打混勻，然后使用預(yù)先濕潤(rùn)的 100 μm 的細(xì)胞過濾器在冰上進(jìn)行過濾。e. 4°C 250 g 離心 5 分鐘收集細(xì)胞沉淀。如細(xì)胞沉淀呈紅色，可吸出上清液后加入 2-4 mL 的紅細(xì)胞裂解液重懸，室溫下裂解 3 分鐘后重新置于 4°C 250 g 離心 5 分鐘收集細(xì)胞沉淀。f. 使用低溫離心機(jī)在 4°C 溫度下以 250 g 離心 3 分鐘后收集細(xì)胞沉淀。如細(xì)胞沉淀呈紅色，可吸出上清液后加入 1-2 mL 的紅細(xì)胞裂解液重懸，盡量避免移液槍槍頭接觸到試管底。室溫下裂解 1 分鐘后重新置于 4°C 低溫離心機(jī)內(nèi)以 250 g 離心 3 分鐘收集細(xì)胞沉淀。g. 往收集的細(xì)胞沉淀中加入適量的人胃上皮類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 進(jìn)行重懸，在 4°C 下 250 g 離心 3 分鐘，重復(fù)該步驟 1-2 次。
注意事項(xiàng)：1. 配制后的培養(yǎng)基不建議在 4°C 冰箱中放置超過 2 周。2. 提取原代組織細(xì)胞時(shí)需保持全程無(wú)菌，避免造成后續(xù)實(shí)驗(yàn)污染。3. 類器官傳代消化時(shí)需時(shí)刻觀察碎片狀態(tài)，出現(xiàn)小細(xì)胞團(tuán)（10-50 個(gè)細(xì)胞）時(shí)應(yīng)終止消化，避免時(shí)間過長(zhǎng)影響類器官后續(xù)生長(zhǎng)活力。4. 基質(zhì)膠操作需全程保持低溫避免凝膠，與細(xì)胞重懸后應(yīng)將其迅速注入細(xì)胞培養(yǎng)孔內(nèi)，盡量避免產(chǎn)生氣泡。5. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品6. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作
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