人結(jié)腸類器官培養(yǎng)試劑盒
MCE 國際站：Human Colonic Organoid Kit
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：Basal Medium A : 4℃, 1 year. Shipping with blue ice.Supplement B (50x) & Supplement C (250x) & Supplement D (250x) : -20°C, 1 year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. Shipping with dry ice.
簡介：MCE 人結(jié)腸類器官培養(yǎng)試劑盒包含結(jié)腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 以及培養(yǎng)添加物 B(50x)，培養(yǎng)添加物 C (250x) 和培養(yǎng)添加 D (250x)。該產(chǎn)品可有效構(gòu)建人結(jié)腸類器官。
概述：MCE 人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)試劑盒包含人結(jié)直腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A、培養(yǎng)添加物 B (50x)、培養(yǎng)添加物 C (250x) 和培養(yǎng)添加 D (250x)。該產(chǎn)品可用于有效構(gòu)建人結(jié)直腸類器官。腸道隱窩底部存在的干細胞及其祖細胞具有自我更新和分化成各種腸道細胞類型的能力，以確保類器官的持續(xù)生長和維持，模擬真實結(jié)直腸組織的特征。人結(jié)直腸類器官對于研究結(jié)直腸發(fā)育、疾病機制和藥物篩選具有重要意義
描述：
• MCE 人體結(jié)腸類器官試劑盒包含人體結(jié)腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基A、人體結(jié)腸類器官添加物B（50x）、人體結(jié)腸類器官添加物C（250x）和人體結(jié)腸類器官添加物D（250x），本產(chǎn)品可用于高效構(gòu)建人體結(jié)腸類器官。
• 干細胞和祖細胞位于腸粘膜隱窩底部，具有自我更新和分化成各種成熟細胞的能力。來自原代組織的結(jié)腸類器官具有自我更新能力，模仿真實結(jié)腸組織的特征。結(jié)腸類器官可用于研究結(jié)腸發(fā)育、疾病機制和藥物篩選。
操作說明：1. 配制人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)基冰上解凍人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)添加物 B、人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)添加物 C、人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)添加物 D，按下列組分配制人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)基，充分混勻后置于冰上備用。a. 按下列組分配制人結(jié)直腸類器官擴增培養(yǎng)基，專門用于原代培養(yǎng)和復蘇。充分混勻后置于冰上備用2. 提取原代組織細胞a. 使用預(yù)冷的原代組織儲存液浸泡新鮮提取的原代人結(jié)直腸組織，并置于 4°C 冰箱中暫時保存。b. 在保證無菌條件下，推薦使用含有 500 μg/mL BSA 的結(jié)直腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 或者 PBS 沖洗去除脂肪或肌肉等非上皮組織成分后的原代人結(jié)直腸組織，然后在細胞培養(yǎng)皿中用無菌剪刀將其切成盡可能小的直徑約為 2 mm 的碎片，隨后轉(zhuǎn)移至含有 10 mL 預(yù)冷的 PBS 的 15 mL 錐形管中。c. 取適量結(jié)直腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 加入 FBS 制備 10% FBS 培養(yǎng)基，在后續(xù)步驟中，使用 10% FBS 培養(yǎng)基潤洗 10 mL 移液管的內(nèi)表面以避免組織粘在移液管壁上。d. 用 10 mL 移液管清洗樣品樣本至少 10 次。靜置錐形管使樣品沉淀在底部，用 10 mL 移液管吸去上清，加入預(yù)冷 10 mL FBS。重復該步驟 3-5 次直到上清沒有碎屑。e. 往管中加入 10 mL 預(yù)冷的組織消化液，放在搖床上在 4°C 下輕輕搖晃 40 分鐘。f. 一旦隱窩結(jié)構(gòu)出現(xiàn)，加入終濃度為 2% 的 FBS 停止消化，然后使用 100 μm 的細胞過濾網(wǎng)進行過濾，收集過濾液。g. 在 4°C 下以 250 g 離心過濾液 3 分鐘收集細胞沉淀。隨后將細胞重懸于人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)基 A 中，重復此前離心步驟 1-2 次以收集細胞沉淀。3. 構(gòu)建類器官a. 在冰上將收集的隱窩重懸于基質(zhì)膠中，推薦重懸密度為 5-20 個隱窩/μL。建議使用基質(zhì)膠原液重懸腫瘤細胞，如需稀釋，請確?；|(zhì)膠體積與稀釋所用的類器官培養(yǎng)基體積的比例高于 2:1。b. 使用預(yù)先濕潤的 200 μL 移液槍槍頭，然后將基質(zhì)膠與細胞混懸液迅速注入 24 孔細胞培養(yǎng)板的底部，盡量避免產(chǎn)生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液。隨后將細胞培養(yǎng)板放入 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中孵育 15-25 分鐘直至凝固。c. 待基質(zhì)膠凝固后，在每個孔邊緣緩慢注入 500 μL 預(yù)熱的人結(jié)直腸類器官擴增培養(yǎng)基，避免破壞已有的凝膠結(jié)構(gòu)，然后將細胞培養(yǎng)板放回 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中。d. 密切關(guān)注類器官生長狀態(tài)，每隔 3-4 天更換一次培養(yǎng)基。一般情況下，5-8 天可觀察到人結(jié)直腸類器官生成。4. 類器官傳代a. 吸去上層培養(yǎng)基，向孔中加入 500 μL 預(yù)冷人結(jié)直腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A，使用細胞刮刀或 1 mL 移液槍槍頭吹打從而將細胞培養(yǎng)孔內(nèi)容物剝離出培養(yǎng)板并轉(zhuǎn)移至 1.5 mL EP 管內(nèi)。b. 使用移液槍充分吹打混勻至類器官與基質(zhì)膠分離，200-250 g 離心 3 分鐘收集沉淀。隨后加入 1 mL 人結(jié)直腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 重懸并輕柔地進行充分吹打，使類器官分散為碎片。如類器官難以吹打成碎片可使用 0.2-0.5 mL 的類器官消化液置于 37°C 培養(yǎng)箱中充分消化 2 分鐘后加入 5 倍消化液體積的人結(jié)直腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 終止消化。c. 在室溫下以 200-250 g 離心 3 分鐘。離心完畢，棄上清，用人結(jié)直腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 或 PBS 清洗 1-2 次后備用。d. 在冰上將收集的隱窩重懸于基質(zhì)膠中，推薦重懸密度為 5-20 個隱窩/μL。重懸后盡快進行鋪板。建議使用基質(zhì)膠原液重懸腫瘤細胞，如需稀釋，請確?；|(zhì)膠體積與稀釋所用的類器官培養(yǎng)基體積的比例高于 2:1。e. 使用預(yù)先濕潤的 200 μL 移液槍槍頭，然后將基質(zhì)膠與細胞混懸液迅速注入 24 孔細胞培養(yǎng)板的底部，盡量避免產(chǎn)生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液。隨后將細胞培養(yǎng)板放入 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中孵育 15-25 分鐘直至凝固。f. 待基質(zhì)膠凝固后，在每個孔邊緣緩慢注入 500 μL 預(yù)熱的人結(jié)直腸類器官穩(wěn)態(tài)培養(yǎng)基，避免破壞已有的凝膠結(jié)構(gòu)，然后將細胞培養(yǎng)板放回 37°C，5% CO2的培養(yǎng)箱中。g. 密切關(guān)注類器官的生長狀態(tài)，記錄多個視野中的結(jié)直腸類器官的形態(tài)和分布。
注意事項：1. 配制后的培養(yǎng)基不建議在 4°C 冰箱中放置超過 2 周。2. 提取原代組織細胞時需保持全程無菌，避免造成后續(xù)實驗污染。3. 類器官傳代消化時需時刻觀察碎片狀態(tài)，出現(xiàn)小細胞團（10-50 個細胞）時應(yīng)終止消化，避免時間過長影響類器官后續(xù)生長活力。4. 基質(zhì)膠操作需全程保持低溫避免凝膠，與細胞重懸后應(yīng)將其迅速注入細胞培養(yǎng)孔內(nèi)，盡量避免產(chǎn)生氣泡。5. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作
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