Annexin V-mCherry/SYTOX Green 細胞凋亡檢測試劑盒
MCE 國際站：Annexin V-mCherry/SYTOX Green Apoptosis Detection Kit
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件： -20℃ 保存一年。避光保存，避免反復凍融。
簡介：Annexin V-mCherry/SYTOX Green 細胞凋亡檢測試劑盒可方便、快捷的檢測細胞凋亡。經 Annexin V-mCherry 和 SYTOX Green 聯合染色后，正常細胞基本無熒光，凋亡細胞呈紅色熒光，壞死細胞呈紅色和綠色熒光。
概述：MCE Annexin V-mCherry/SYTOX Green 細胞凋亡檢測試劑盒采用 mCherry 標記的重組人 Annexin V 檢測細胞凋亡。在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS）位于細胞膜內側；細胞凋亡早期，PS 會外翻到細胞膜外側。Annexin V（膜聯蛋白 V）是一種 Ca 依賴性磷脂結合蛋白，可與 PS 特異性結合，因此 Annexin V 常作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。Annexin V 經 mCherry 標記后可發(fā)紅色熒光，利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發(fā)生。此外，本試劑盒中的SYTOX Green 是一種非細胞膜滲透性的綠色熒光染料，只能對死細胞染色。經 Annexin V-mCherry 和 SYTOX Green 聯合染色后，正常細胞基本無熒光，凋亡細胞呈紅色熒光，壞死細胞呈紅色和綠色熒光。
描述：
Annexin V-mCherry/SYTOX Green 凋亡檢測試劑盒提供了一種快速、方便的檢測細胞凋亡和壞死的方法。在正常活細胞中，磷脂酰絲氨酸 (PS) 位于細胞膜的細胞質表面。在細胞凋亡開始時，PS 從膜的內小葉轉移到外小葉。Annexin V 是一種 35-36 kDa Ca2+ 依賴性磷脂結合蛋白，對 PS 具有高親和力。用 mCherry 標記的 Annexin V 可以通過與外小葉上暴露的 PS 結合來識別凋亡細胞。SYTOX Green 是一種出色的綠色熒光核和染色體復染劑，僅適用于死細胞。用 Annexin V-mCherry 和 SYTOX Green 染色細胞后，活細胞幾乎不顯示熒光，凋亡細胞顯示紅色熒光，壞死細胞顯示紅色和綠色熒光。
操作說明：1. 收集細胞：收集 1-5 × 10 個細胞。懸浮細胞：1000 g 離心 5 min，棄去上清。加入 1 mL 預冷的 PBS 輕輕重懸細胞沉淀，1000 g 離心 5 min，棄去上清，保留細胞沉淀。貼壁細胞：小心吸取細胞培養(yǎng)液保存?zhèn)溆?。加?PBS 洗滌后，加入適量胰酶消化液（盡量不含 EDTA，以免影響 Annexin V 和 PS 的結合）消化細胞。加入前面收集的培養(yǎng)液，輕輕吹打細胞，制成單細胞懸液，1000 g 離心 5 min，棄去上清。加入 1 mL 預冷的 PBS 輕輕重懸細胞沉淀，1000 g 離心 5 min，棄去上清，保留細胞沉淀。2. 加入 195 μL Binding Buffer，輕輕重懸細胞。3. 加入 5 μL Annexin V- mCherry，輕輕混勻。4. 加入 1 μL SYTOX Green，輕輕混勻。5. 室溫下避光孵育 10-20 min。注：孵育過程中可輕輕顛倒數次以加強染色效果。6. 檢測與分析a. 流式細胞儀檢測：用流式細胞儀檢測熒光強度注：流式檢測時，mCherry 最大激發(fā)波長為 587 nm，最大發(fā)射波長為 610 nm；SYTOX Green-DNA 最大激發(fā)波長為 504 nm，最大發(fā)射波長為 523 nmb.建議設置三組對照：未染色組、 SYTOX Green 單染組及 Annexin V-mCherry 單染組。 熒光顯微鏡檢測：1000 g 離心 5 min，棄去上清，加入 50-100 μL Binding Buffer 輕輕重懸細胞沉淀，涂片后用熒光顯微鏡檢測熒光強度。
注意事項：1. 熒光染料都存在淬滅的問題，染色后應盡快檢測熒光強度，且整個實驗過程盡量避光下進行。2. 若使用胰酶處理貼壁細胞，應盡可能地去除胰酶，防止 Annexin V- mCherry 降解從而導致染色失敗。3. Annexin V- mCherry 和 SYTOX Green 均對人體有害，操作時務必小心。4. 本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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