細胞凋亡檢測試劑盒 (Hoechst法)
MCE 國際站：Cell Apoptosis Analysis Kit (Hoechst staining)
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：4oC 保存 6 個月或 -20oC 保存一年避光保存
簡介：MCE 細胞凋亡檢測試劑盒 (Hoechst 法) 采用 Hoechst 33258 染色的方法快速檢測細胞凋亡。
概述：MCE 細胞凋亡檢測試劑盒 (Hoechst 法) 采用 Hoechst 33258 染色的方法快速檢測細胞凋亡。Hoechst 33258 是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料。細胞凋亡時，細胞膜通透性增強，染色質發(fā)生固縮，且凋亡細胞膜上的 p-糖蛋白泵功能受損而不能及時將 Hoechst 33258 排出細胞，故凋亡細胞經 Hoechst 33258 染色后熒光強度比正常細胞明顯增強。使用熒光顯微鏡檢測時，正常細胞為弱藍色熒光，凋亡細胞為強藍色熒光。本試劑盒常用于貼壁細胞、懸浮細胞及組織切片的細胞凋亡檢測，染色快速方便，最快僅需 25 分鐘即可完成。
描述：
MCE 細胞凋亡分析試劑盒（Hoechst 染色）提供了一種快速、方便的檢測細胞凋亡的方法。Hoechst 33258 是一種藍色熒光染料（與 dsDNA 結合時激發(fā)/發(fā)射最大值 ≈ 352/461 nm），它使凋亡細胞中濃縮的染色質比正常細胞中的染色質更亮。它在凋亡細胞中顯示強藍色熒光，但在正常細胞中僅顯示微弱熒光。
操作說明：貼壁細胞1. 取一潔凈蓋玻片，用 70% 乙醇浸泡 5 min，無菌超凈臺中吹干備用。注：也可將蓋玻片用無菌 PBS 或 0.9% NaCl 洗滌三次，再用細胞培養(yǎng)液洗滌一次后備用。2. 將蓋玻片置于六孔板，接種細胞，培養(yǎng)至細胞密度約 50-80%3.刺激細胞發(fā)生凋亡。棄去培養(yǎng)液,加入0.5mL Fixative Solution,室溫固定10 min 以上。注:4℃ 固定過夜效果更佳。4.棄去 Fixative Solution,加入PBS 或 0.9% NaCI洗滌兩次,每次3min。5.加入0.5 mL Hoechst 33258 Stain,染色5min。6.棄去染色液,用 PBS 或0.9% NaCI洗滌兩次,每次3min。7.在載玻片上加一滴Antifade Mounting Medium,小心蓋上貼有細胞的蓋玻片。注意避免產生氣泡。8. 熒光顯微鏡下檢測熒光強度。注：Hoechst 33258 和雙鏈 DNA 結合后，最大激發(fā)波長為 352 nm，最大發(fā)射波長為 461 nm。懸浮細胞1.4°℃,1000 g 離心 3-5 min,收集10-10細胞。2.加入0.5 mL Fixative Solution,室溫固定10 min 以上。注:4°℃ 固定過夜效果更佳。3.4℃, 1000 g 離心 3-5 min,棄去Fixative Solution,加入PBS 或0.9% NaCl洗滌兩次,每次3min。4.加入約 50μL PBS或0.9% NaCI輕輕重懸細胞沉淀,并滴加至載玻片上。5.室溫下晾干至細胞不會輕易隨液體流動。6.加0.5 mL Hoechst33258 Stain,染色5min。7.棄去染色液,用 PBS 或0.9%NaCI洗滌兩次,每次3min。8.在載玻片上加一滴Antifade Mounting Medium,小心蓋上蓋玻片。注意避免產生氣泡。9.熒光顯微鏡下檢測熒光強度。注:Hoechst 33258和雙鏈DNA結合后,最大激發(fā)波長為352 nm,最大發(fā)射波長為461 nm。組織切片1.常規(guī)包埋切片后,將切片處理至可用于免疫組化染色。2.加入 PBS 或 0.9% NaCI洗滌兩次,每次3min。3.加入0.5 mL Hoechst 33258 Stain,染色5min。4.棄去染色液,用PBS 或0.9% NaCl洗滌兩次,每次3min。5.小心將切片置于載玻片上,加一滴Antifade Mounting Medium,小心蓋上蓋玻片。注意避免產生氣泡。6.熒光顯微鏡下檢測熒光強度。注:Hoechst 33258 和雙鏈DNA 結合后,最大激發(fā)波長為352 nm,最大發(fā)射波長為461 nm。
注意事項：1. 熒光染料存在淬滅的問題，染色后應盡快檢測熒光強度。2. Hoechst 33258 對光敏感，整個實驗過程盡量避光下進行。3. Hoechst 33258 對人體有害，操作時務必小心。4. 本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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