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產品貨號：M1051
儲存條件：4℃保存
產品組分
貨號 | 組分 | 規(guī)格 |
M1051A | Dextrin Beads 6FF | 5ml |
M1051B | binding buffer（平衡液） | 100ml*2 |
M1051C | washing buffer（洗雜液） | 100ml*2 |
M1051D | elution buffer（洗脫液） | 50ml |
M1051E | 3ml AC層析空柱 | 10套 |
M1051F | 溶jun酶 | 60mg |
產品簡介
MBP標簽蛋白純化試劑盒能夠純化帶有麥芽糖結合蛋白(MBP)標簽蛋白。MBP可促進連接蛋白的正確折疊，增加在細菌中過量表達的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。Dextrin Beads 6FF 可以一步純化 MBP 融合蛋白，結合的融合蛋白可以用10 mM 麥芽糖進行溫和洗脫，保護了標簽蛋白的活性。如果要去除 MBP 融合部分可用位點特異性蛋白酶切除。
注意事項：
1、試劑盒中的Dextrin Beads 6FF體積5ml為beads體積，總體積10ml（保護液為20%乙醇溶液）使用前需要充分混合均勻；
2、請勿在-20oC或更低溫度冷凍保存Dextrin Beads 6FF。
3、若離心不能wan全除去蛋白樣品中的不溶物，可以將樣品溶液用0.45µm的濾膜過濾。
4、若使用本說明書提供的條件無法達到理想的純化效果，可嘗試改變洗雜液和洗脫液中咪唑的濃度和(或)pH。
5、請穿實驗服戴一次性手套操作。
實驗步驟
1. 樣品準備
樣品在上樣前建議離心或用0.22μm 或 0.45μm 濾膜過濾，減少雜質，提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。
2. Dextrin Beads 6FF 裝填
重力柱的裝填
1) 取3ml AC層析空柱，純水浸泡墊片后，裝入下墊片（偏小的墊片），加入適量純水潤洗柱管和墊片，關閉下出口。
2) 將 Dextrin Beads 6FF 混合均勻，用槍頭吸取適量填料加入至重力柱中(介質實際體積占懸液的一半)，打開下出口流干保護液。
3) 加入適量純水沖洗介質，待柱管中液體重力流干后，關閉下出口。
4) 裝入潤洗后的上墊片，確保墊片與填料之前沒有空隙，且保持水平。
5) 裝填好的重力柱可以直接加入平衡液進行平衡，暫不使用時則加入保護液，2-8℃保存。
3.樣品純化
Dextrin Beads重力柱使用：各溶液用量均按照柱體積計算（例如：2 個柱體積，1 ml 規(guī)格對應為 2 ml 溶液，5 ml 規(guī)格對應為 10 ml 溶液）。整個純化流程大約需要 30 min（主要取決于樣品體積和溶液的粘稠性），操作快捷。
1) 將 Dextrin Beads 6FF 重力柱固定在鐵架臺上，依次去掉下端塞和上端塞，流干重力柱的保護液。
2) 向柱管中加入 5 個柱體積的平衡液，進行平衡 ，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護蛋白的作用。
3) 將樣品加到平衡好的重力柱中，樣品保留時間至少 2 min，保證目的蛋白與介質充分接觸 ，提高目的蛋白的回收率。收集流出液，用于 SDS-PAGE 分析蛋白質的結合情況，在出現(xiàn)問題時，更方便尋找解決問題的方案。
4) 用 10-15 倍柱體積的洗雜液進行清洗 ，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。
5) 使用 5-10 倍柱體積的洗脫液進行目的蛋白的洗脫 ，分段收集，每一個柱體積收集一管，分別檢測，既可以保證所有結合的目的蛋白被洗脫，又可以得到高純度和高濃度的蛋白。
6) 依次使用 3 倍柱體積的平衡液和 5 倍柱體積的去離子水平衡填料。將重力柱保存在等體積的 20%乙醇中，置于 2-8℃保存，防止填料被細菌污染。
4. SDS-PAGE 檢測
將使用純化產品得到的樣品（包括流出組分、洗雜組分和洗脫組分）以及原始樣品使用 SDS-PAGE 檢測純化效果。
5. 在位清洗
Dextrin Beads 6FF 純化產品可以重復使用而無需再生，但隨著非特異性結合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和結合載量都下降，需要進行在位清洗操作（Cleaning-in-Place，CIP）。
3 倍柱體積的去離子水；
3 倍柱體積的 0.1% SDS 或 0.1 M NaOH 溶液；
3 倍柱體積去離子水，20%乙醇 2-8℃保存。
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