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  CelGreen(10000*)核酸染料

貨號：CG001

儲存條件：  常溫避光可保存2年。

CelGreen核酸染料特點(diǎn)

●無毒性：CelGreendu特的油性和大分子量特點(diǎn)使其不能穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，艾姆斯氏試驗結(jié)果也表明，該染料的誘變性遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于EB。

●靈敏度高：適用于各種大小片段的電泳染色，對核酸遷移的影響小于SYBR Green I。

●穩(wěn)定性高：適用于使用微波或其它加熱方法制備瓊脂糖凝膠；室溫下在酸或堿緩沖液中極其穩(wěn)定，耐光性強(qiáng)。

●信噪比高：樣品熒光信號強(qiáng)，背景信號低。

●操作簡單：與EB一樣，在預(yù)制膠和電泳過程中染料不降解；而電泳后染色過程也只需30分鐘且無需脫色或沖洗 ，即可直接用紫外凝膠透射儀觀察。

●適用范圍廣：可選擇電泳前染色（膠染法）或電泳后染色（泡染法）；適用于瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠電泳；可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。

●在254nm可見光附近可得到最佳激發(fā)。

CelGreen使用方法簡介

1．膠染法（用法同EB）（推薦方法）

   （1）制膠時加入CelGreen 核酸染料（例如：每50mL 瓊脂糖溶液中加入5μL CelGreen 10,000× 儲液，以此比例類推）。

（2）按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。

注意事項：

u此方法染色染料用量相對較少。500 μL染料大約可以做100塊 50mL的膠。

 u由于CelGreen具有良好的熱穩(wěn)定性，可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷卻。搖晃，振蕩或者翻轉(zhuǎn)以保證染料充分混勻。也可以選擇將CelGreen儲液加到瓊脂糖粉末 和電泳緩沖液中，然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。CelGreen兼容所有常用的電泳緩沖溶液。

 u如果總是看到條帶彌散或分離不理想，建議使用泡染法染色以確認(rèn)問題是否與染料有關(guān)。如果染色后問題依舊存在，則說明問題與染料無關(guān)，請嘗試：降低瓊脂糖濃度；選用更長的凝膠；延長凝膠時間以保證邊緣清晰；改進(jìn)上樣技巧或選擇泡染法染色。

u此方法不適合預(yù)制聚丙烯酰胺凝膠，對于聚丙烯酰胺凝膠請使用泡染法。

2．泡染法

（1）按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。

（2）用H2O將CelGreen 10,000× 儲液稀釋約3,300倍到0.1M NaCl中，制成3× 染色液（例如將15μL CelGreen 10,000× 儲液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中）。

（3）將凝膠小心地放入合適的容器中，如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的3× 染色液浸沒凝膠。室溫振蕩染色30min左右，最佳染色時間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對 于含3.5～10%丙烯酰胺的凝膠，染色時間通常介于30min到1h，并隨丙烯酰胺含量增加而延長。

（4）用 480nm 可見光系統(tǒng)觀察結(jié)果。

注意事項：

u用泡染法染色時，染料用量較多。單次使用的染色液可重復(fù)使用3次左右。

u3 × CelGreen染色液可以大量制備，在室溫下避光保存直至用完。

3．核酸電泳的PAGE步驟：

（1）將TBE制備的凝膠放入電泳槽中，用夾子夾住邊緣。

（2）用配置凝膠溶液同一批次的5×TBE灌滿緩沖液槽。用注射器排除凝膠底部的氣泡。

（3）用注射器吸取1×TBE沖洗加樣孔。將DNA樣品和適量的6×凝膠上樣緩沖液混合，用微量移液管加入加樣孔。

（4）將電極與電源相連（正極接下槽），打開電源一般90V；1～8V/cm。進(jìn)行電泳9h。

（5）電泳至標(biāo)準(zhǔn)參照染料遷移至所需位置（一般是電泳到二甲苯wan全遷出，溴酚藍(lán)距底邊2～3cm停止）。關(guān)閉電源，拔掉插頭，棄去電泳槽中的電泳液。

（6）將凝膠取下來放入，染色皿中，加3XCelGreen的1X緩沖液中的振蕩染色30-60分，放置在紫外檢測即可。

注意事項：

PAGE膠與瓊酯糖凝膠不同，不能用預(yù)染或點(diǎn)染的方法；只能用泡染的方法顯色，由于聚丙

烯酰胺比較致密，染料不容易深入，顯色效果沒有瓊酯糖凝膠好。

特別提醒：

u如果您使用的是紫外成像儀，請選擇CelRed；如果您使用激光成像儀或希望在可見光下觀測，請選擇CelGreen。

u在極少數(shù)情況下，質(zhì)粒經(jīng)某些酶切后的DNA樣品會出現(xiàn)拖尾和分辨率降低，此時建議同時嘗試兩種染色方法以決定哪種方法更加合適。