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貨物所在地：北京北京市
更新時間：2024-10-04 21:00:07
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LabFect 小核酸轉(zhuǎn)染試劑
貨號：T1011
存儲條件：藍冰運輸，4°C保存，超一個月不用于-20°C儲存，避免反復凍融。-20℃保存條件下，有效期為1年。
產(chǎn)品說明：
LabFect可用來轉(zhuǎn)染 siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以內(nèi)的小分子RNA和DNA，轉(zhuǎn)染細胞包括絕大多數(shù)貼壁生長的細胞，如一般細胞株、腫瘤細胞株等。目前，無論國外還是國內(nèi)，轉(zhuǎn)染試劑的主要成分均為脂質(zhì)體或聚乙烯亞胺(Polyethylenimine, PEI)，這兩種成分都具有很大的細胞毒性，并且轉(zhuǎn)染效果不好。LabFect采用新型的動物源性的納米材料，毒性很低并且擁有非常卓yue的轉(zhuǎn)染性能。與其它品牌的小核酸轉(zhuǎn)染試劑相比，LabFect的細胞轉(zhuǎn)染陽性率一般在90%以上，Lamin A/C基因抑制效率在95%以上，而其它品牌轉(zhuǎn)染試劑的細胞轉(zhuǎn)染陽性率一般不超過 70%，Lamin A/C基因抑制效率不超過75%。LabFect細胞毒性很低，轉(zhuǎn)染細胞死亡率不到10%，而其它品牌試劑的轉(zhuǎn)染細胞死亡率一般在30%以上。血清對轉(zhuǎn)染效果沒有影響，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液。
產(chǎn)品特點：
卓yue的細胞轉(zhuǎn)染性能：細胞轉(zhuǎn)染陽性率高達 90%以上，基因敲除效果明顯，A549 細胞 Lamin A/C基因敲除效率在95%以上；
極低的細胞毒性：轉(zhuǎn)染細胞死亡率不到 10%，大大降低了因細胞毒性 對實驗結果的影響；
轉(zhuǎn)染細胞范圍廣，絕大多數(shù)貼壁細胞株都能獲得比較理想的轉(zhuǎn)染結果。
應用：
siRNA 轉(zhuǎn)染
antisense RNA 轉(zhuǎn)染
200bp 內(nèi)的小分子 DNA 轉(zhuǎn)染
操作步驟：本說明書適用于24孔培養(yǎng)板的轉(zhuǎn)染實驗，其他規(guī)格的培養(yǎng)板的用量參照下面表格，表格給出的是每孔的用量與體積。
1. 細胞接種：
轉(zhuǎn)染前一天接種細胞，每孔500μl培養(yǎng)基，使細胞在轉(zhuǎn)染時密度在30-50%，盡量不要使用抗生素。
2. siRNA-LabFect混合物準備：
a. 6pmol siRNA用50μl無血清培養(yǎng)基稀釋。
b. 2μl LabFect 用50μl無血清培養(yǎng)基稀釋。輕輕混勻，室溫孵育5min。注意：確保在25 min內(nèi)執(zhí)行第三步操作，不要過于延遲。
c. 孵育5min后，將siRNA稀釋液與LabFect稀釋液混合（總體積100μl）。輕輕混勻，室溫孵育20 min。
3. 將混合物加到培養(yǎng)的細胞內(nèi)（*培養(yǎng)基培養(yǎng)）：
a. 將100μl混合物加入培養(yǎng)孔內(nèi)，培養(yǎng)孔內(nèi)含有0.5ml培養(yǎng)的細胞。輕輕晃動培養(yǎng)板，混勻。
b. 37°C 培養(yǎng) 18-72h，檢測基因抑制效果。如果需要，細胞培養(yǎng)4-6h時可以更換培養(yǎng)基，但不是必須。孵育時間的長短，取決于細胞類型、所干擾基因本身及分析方法。可設置不同的孵育時間進行實驗以確定最jia孵育時間。
轉(zhuǎn)染實驗優(yōu)化：
為了提高轉(zhuǎn)染效率，最hao對轉(zhuǎn)染條件進行優(yōu)化，特別是首ci使用。例如：24孔培養(yǎng)板，調(diào)整siRNA與LabFect試劑的用量。siRNA用量在0.6-30 pmol (final concentration 1-50 nM)之間調(diào)整，LabFect試劑用量在1.0-3.0μl之間調(diào)整。
轉(zhuǎn)染實驗要點：
轉(zhuǎn)染過程盡量不要使用抗生素，否則會導致細胞死亡增加； 首ci實驗 siRNA 的用量設置在終濃度 10nM、30nM、50nM、100 nM 進行摸索 ，后續(xù)實驗根據(jù)實驗結果修改。
質(zhì)量控制
本產(chǎn)品經(jīng)嚴格的質(zhì)量檢驗證明，無生物污染
注意：
本產(chǎn)品僅用于科研實驗
LabFect Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels
Surface area/well | Vol. of growth medium | Vol. of dilution medium | siRNA Amount | LabFect | |
(cm2) | (µl) | (µl) | (pmol) | (µl) | |
96-well | 0.3 | 100 | 2 x 10 | 1.2 | 0.4 |
48-well | 0.8 | 250 | 2 x 25 | 3 | 1 |
24-well | 2 | 500 | 2 x 50 | 6 | 2 |
12-well | 4 | 1000 | 2 x 100 | 12 | 4 |
6-well | 10 | 2500 | 2 x 250 | 30 | 10 |
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