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          快速內(nèi)切酶HinfI
          • 快速內(nèi)切酶HinfI
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          貨物所在地:北京北京市

          更新時間:2024-10-01 21:00:06

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          快速內(nèi)切酶HinfI快速內(nèi)切酶經(jīng)過基因工程重組、能夠在5~15分鐘內(nèi)精確完成DNA切割的高保真限制性內(nèi)切酶,適用于質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切??焖賰?nèi)切酶具有如下特點:5~15分鐘內(nèi)即可完成酶切;共用一種酶切Buffer,大大簡化酶切反應(yīng)體系;良好的酶活冗余度,輕松應(yīng)對底物過量或困難模板酶切

          快速內(nèi)切酶HinfI


          產(chǎn)品貨號:F5593s

          儲存條件:-20℃


          產(chǎn)品組成

          組分

          規(guī)格

          LabFDHinfI

          500ul

          10×LabFD™ Buffer

          3x1ml

          10×LabFD™ Color Buffer

          3x1ml


          產(chǎn)品簡介

          LabFD™快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組、能夠在5~15分鐘內(nèi)精確完成DNA切割的高保真限制性內(nèi)切酶,適用于質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切。LabFD™快速內(nèi)切酶具有如下特點:5~15分鐘內(nèi)即可完成酶切;共用一種酶切Buffer,大大簡化酶切反應(yīng)體系;良好的酶活冗余度,輕松應(yīng)對底物過量或困難模板酶切。此外,LABLEAD去磷酸化、連接試劑在LabFD™酶切Buffer中具有百分之bai活性,支持一管化反應(yīng),提升“酶切-修飾-連接"的體驗。

          建議反應(yīng)條件

          LabFD™緩沖液;

          37℃溫育;

          參照“DNA快速酶切流程"配制反應(yīng)體系。

          失活條件

          80℃溫育20min。

          質(zhì)量控制

          功能活性檢測

          最ahi反應(yīng)溫度下,在20ul反應(yīng)體系中,1ul LabFD™ HinfI能夠在15min內(nèi)*消化1ug λDNA。

          超長時間溫育檢測

          最shi反應(yīng)溫度下,將1ul LabFD™ HinfI與1ug λDNA共同溫育3h,未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解,延時酶切可能出現(xiàn)星號活性。

          酶切-連接-再酶切檢測

          最shi反應(yīng)溫度下,使用1ul LabFD™ HinfI消化底物,回收酶切產(chǎn)物。在22℃下使用適量Fast T4 DNA Ligase可以將酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后,使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。

          使用方法

          1.DNA快速酶切流程

          1)在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系:


          質(zhì)粒DNA

          PCR產(chǎn)物

          基因組DNA

          ddH2O

          15ul

          16ul

          30ul

          10×LabFD Buffer或10×LabFD Color Buffer

          2ul

          3ula

          5ul

          底物DNA

          2ul(up to 1ug)

          10ul(~0.2ug)

          10ul(5ug)

          LabFD HinfI

          1ul

          1ul

          5ul

          Total

          20ul

          30ul

          50ul

          注:本體系適用于經(jīng)過純化的PCR產(chǎn)物酶切,未純化的PCR具備一定的離子強度,10xLabFDTMbuffer加入量可適當減少至2ul。但由于DNA聚合酶同時具有外切酶活性,會影響酶切產(chǎn)物,因此如下一步需進行克隆等操作,建議酶切前對PCR產(chǎn)物進行純化。

          2)輕柔吸打或輕彈管壁以混勻(切勿渦旋),然后瞬時離心以收集掛壁液滴;

          3)37℃溫育15min(質(zhì)粒),或15~30min(PCR產(chǎn)物),或30~60min(基因組DNA);

          4)80℃溫育20min即可使酶失活,停止反應(yīng)。

          2.雙酶切或多酶切

          1)每種快速內(nèi)切酶的用量為1ul,并根據(jù)需要適當擴大反應(yīng)體系;

          2)所有快速內(nèi)切酶的體積總和不得超過總反應(yīng)體系的1/10;


          3.適用于質(zhì)粒的擴大反應(yīng)體系

          DNA

          1ug

          2ug

          3ug

          4ug

          5ug

          LabFDHinfI

          1ul

          2ul

          3ul

          4ul

          5ul

          10×LabFD™ Buffer或10×LabFD™ Color Buffer

          2ul

          2ul

          3ul

          4ul

          5ul

          Total

          20ul

          20ul

          30ul

          40ul

          50ul

          注:如果總反應(yīng)體系大于20ul,應(yīng)適當增加溫育時間,盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。

          不同DNA中的酶切位點數(shù)量

          λDNA

          ΦX174

          pBR322

          pUC57

          pUC18/19

          SV40

          M13mp18/19

          Adeno2

          148

          21

          10

          5

          6

          10

          27

          72

          甲基化修飾影響

          Dam

          Dcm

          CpG

          EcoKI

          EcoBI

          無影響

          無影響

          序列可能重疊

          剪切阻斷

          無影響

          序列可能重疊

          剪切受阻

          在不同反應(yīng)緩沖液中的活性


          LabFD Buffer

          Thermo Scientific

          FastDigest Buffer

          NEB

          CutSmart®Buffer

          Takara

          QuickCut™Buffer

          活性

          百分之bai

          百分之bai

          百分之bai

          百分之bai

          注:活性數(shù)據(jù)來LABLEAD限制酶標準反應(yīng)體系下的檢測。







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