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貨物所在地:北京北京市
更新時間:2024-10-01 21:00:06
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EagI快速內(nèi)切酶
產(chǎn)品貨號:F5535s
儲存條件:-20℃
同裂酶:BseX3I, BstZI, EclXI, Eco52I, XmaIII
注:同裂酶對于不同的甲基化修飾也許具有不同敏感性。
產(chǎn)品組成
組分 | 規(guī)格 |
LabFD™ EagI | 25ul |
10×LabFD™ Buffer | 1ml |
10×LabFD™ Color Buffer | 1ml |
產(chǎn)品簡介
LabFD™快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組、能夠在5~15分鐘內(nèi)精確完成DNA切割的高保真限制性內(nèi)切酶,適用于質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切。LabFD™快速內(nèi)切酶具有如下特點:5~15分鐘內(nèi)即可完成酶切;共用一種酶切Buffer,大大簡化酶切反應(yīng)體系;良好的酶活冗余度,輕松應(yīng)對底物過量或困難模板酶切。此外,LABLEAD去磷酸化、連接試劑在LabFD™酶切Buffer中具有baifenzhi100活性,支持一管化反應(yīng),提升“酶切-修飾-連接"的體驗。
活性定義
37℃下,在20ul反應(yīng)體系中,1ul酶能夠在15 min內(nèi)*消化1ugλDNA (HindIII digest)。
建議反應(yīng)條件
1×LabFD™緩沖液;
37℃溫育;
參照“DNA快速酶切流程"配制反應(yīng)體系。
失活條件
80℃溫育20min。
質(zhì)量控制
功能活性檢測
最shi反應(yīng)溫度下,在20ul反應(yīng)體系中,1ul LabFD™ EagI能夠在15min內(nèi)*消化1ug λDNA(HindIII digest)。
超長時間溫育檢測
最shi反應(yīng)溫度下,將1ul LabFD™ EagI與1ug λDNA(HindIII digest)共同溫育3h,未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解,延時酶切可能出現(xiàn)星號活性。
酶切-連接-再酶切檢測
最shi反應(yīng)溫度下,使用1ul LabFD™ EagI消化底物,回收酶切產(chǎn)物。在22℃下使用適量Fast T4 DNA Ligase可以將酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后,使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。
非特異性內(nèi)切酶活性檢測
最shi反應(yīng)溫度下,將1ul LabFD™ EagI與1ug超螺旋質(zhì)粒DNA共同溫育4h,使用瓊脂糖凝膠電泳檢測,質(zhì)粒DNA仍然處于超螺旋狀態(tài)。
藍(lán)白斑檢測
將含有單一lacZα基因的載體以1ul LabFD™ EagI消化,重新連接后轉(zhuǎn)化入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞,涂布在含有對應(yīng)抗生素、IPTG和 X-gal的LB培養(yǎng)基平板上。連接正確的產(chǎn)物會生長出藍(lán)色菌落,而連接錯誤(即DNA末端切口不完整)的產(chǎn)物將得到白色菌落。對于 LabFD™ 系列限制酶而言,白色菌落比例應(yīng)小于 1%。
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