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          目錄:北京蘭博利德商貿(mào)有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>內(nèi)切酶>> 快速內(nèi)切酶PvuII

          快速內(nèi)切酶PvuII
          • 快速內(nèi)切酶PvuII
          參考價(jià)180
          具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

          參考價(jià):¥ 180

          具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
          • 品牌
          • 型號(hào)
          • 代理商 廠商性質(zhì)
          • 北京市 所在地
          規(guī)格

          200 rxns

          屬性

          供貨周期:現(xiàn)貨

          >
          規(guī)格
          200 rxns180元9999件可售

          更新時(shí)間:2022-08-20 15:59:10瀏覽次數(shù):155評(píng)價(jià)

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          供貨周期 現(xiàn)貨 儲(chǔ)存條件 -20℃
          快速內(nèi)切酶PvuII快速內(nèi)切酶經(jīng)過基因工程重組、能夠在5~15分鐘內(nèi)精確完成DNA切割的高保真限制性內(nèi)切酶,適用于質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切。LabFD™快速內(nèi)切酶具有如下特點(diǎn):5~15分鐘內(nèi)即可完成酶切;共用一種酶切Buffer,大大簡(jiǎn)化酶切反應(yīng)體系;良好的酶活冗余度,輕松應(yīng)對(duì)底物過量或困難模板酶切。

          快速內(nèi)切酶PvuII 



          產(chǎn)品貨號(hào)F5604s

          儲(chǔ)存條件-20℃


          產(chǎn)品組成

          組分

          規(guī)格

          LabFD™ PvuII

          200ul

          10×LabFD™ Buffer

          2x1ml

          10×LabFD™ Color Buffer

          2x1ml


          產(chǎn)品簡(jiǎn)介

          LabFD™快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組、能夠在5~15分鐘內(nèi)精確完成DNA切割的高保真限制性內(nèi)切酶,適用于質(zhì)粒DNAPCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切LabFD™快速內(nèi)切酶具有如下特點(diǎn):5~15分鐘內(nèi)即可完成酶切;共用一種酶切Buffer,大大簡(jiǎn)化酶切反應(yīng)體系;良好的酶活冗余度,輕松應(yīng)對(duì)底物過量或困難模板酶切。此外,LABLEAD去磷酸化、連接試劑在LabFD™酶切Buffer中具有百分之bai活性,支持一管化反應(yīng),提升“酶切-修飾-連接"的體驗(yàn)。

          建議反應(yīng)條件

          1×LabFD™緩沖液;

          37℃溫育;

          參照DNA快速酶切流程"配制反應(yīng)體系。

          失活條件

          不可熱失活,請(qǐng)使用酚氯仿抽提或柱純化。

          質(zhì)量控制

          功能活性檢測(cè)

          最shi反應(yīng)溫度下,在20ul反應(yīng)體系中,1ul LabFD PvuII能夠在15min內(nèi)*消化1ugλDNA。

          超長(zhǎng)時(shí)間溫育檢測(cè)

          最shi反應(yīng)溫度下,將1ul LabFD™ PvuII1ug λDNA共同溫育3h,未檢測(cè)到其他核酸酶污染或星號(hào)活性引起的底物非特異性降解,延時(shí)酶切可能出現(xiàn)星號(hào)活性。

          酶切-連接-再酶切檢測(cè)

          最shi反應(yīng)溫度下,使用1ul LabFD™ PvuII消化底物,回收酶切產(chǎn)物。在22℃下使用適量Fast T4 DNA Ligase可以將酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后,使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。

          非特異性內(nèi)切酶活性檢測(cè)

          最shi反應(yīng)溫度下,將1ul LabFD™ PvuII1ug超螺旋質(zhì)粒DNA共同溫育4h,使用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),質(zhì)粒DNA仍然處于超螺旋狀態(tài)。

          使用方法

          1.DNA快速酶切流程

          1)在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系:


          質(zhì)粒DNA

          PCR產(chǎn)物

          基因組DNA

          ddH2O

          15ul

          16ul

          30ul

          10×LabFD Buffer10×LabFD Color Buffer

          2ul

          3ula

          5ul

          底物DNA

          2ul(up to 1ug)

          10ul(~0.2ug)

          10ul(5ug)

          LabFD  PvuII

          1ul

          1ul

          5ul

          Total

          20ul

          30ul

          50ul


          注:本體系適用于經(jīng)過純化的PCR產(chǎn)物酶切,未純化的PCR具備一定的離子強(qiáng)度,10xLabFDTMbuffer加入量可適當(dāng)減少至2ul。但由于DNA聚合酶同時(shí)具有外切酶活性,會(huì)影響酶切產(chǎn)物,因此如下一步需進(jìn)行克隆等操作,建議酶切前對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化。

          2)輕柔吸打或輕彈管壁以混勻(切勿渦旋),然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴;

          337℃溫育15min(質(zhì)粒),或15~30minPCR產(chǎn)物),或30~60min(基因組DNA);

          4)酚氯仿抽提或柱純化。

          2.雙酶切或多酶切

          1)每種快速內(nèi)切酶的用量為1ul,并根據(jù)需要適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體系;

          2)所有快速內(nèi)切酶的體積總和不得超過總反應(yīng)體系的1/10;

          3)如果所用的幾種快速內(nèi)切酶的最shi反應(yīng)溫度不同,應(yīng)先以最shi溫度低的酶開始酶切,再添加最shi溫度較高的酶,在其最shi反應(yīng)溫度下進(jìn)行酶切反應(yīng)。

          3.適用于質(zhì)粒的擴(kuò)大反應(yīng)體系

          DNA

          1ug

          2ug

          3ug

          4ug

          5ug

          LabFD™ PvuII

          1ul

          2ul

          3ul

          4ul

          5ul

          10×LabFD™ Buffer或10×LabFD™ Color Buffer

          2ul

          2ul

          3ul

          4ul

          5ul

          Total

          20ul

          20ul

          30ul

          40ul

          50ul

          注:如果總反應(yīng)體系大于20ul,應(yīng)適當(dāng)增加溫育時(shí)間,盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。

          不同DNA中的酶切位點(diǎn)數(shù)量

          λDNA

          ΦX174

          pBR322

          pUC57

          pUC18/19

          SV40

          M13mp18/19

          Adeno2

          15

          0

          1

          2

          2

          3

          3

          24

          甲基化修飾影響

          Dam

          Dcm

          CpG

          EcoKI

          EcoBI

          無影響

          無影響

          無影響

          無影響

          序列可能重疊

          剪切可能受影響

          在不同反應(yīng)緩沖液中的活性


          LabFD Buffer

          Thermo Scientific

          FastDigest Buffer

          NEB

          CutSmart®Buffer

          Takara

          QuickCut™Buffer

          活性

          百分之bai

          百分之bai

          百分之bai

          百分之bai

          注:活性數(shù)據(jù)來LABLEAD限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測(cè)。



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