目錄:北京蘭博利德商貿(mào)有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>內(nèi)切酶>> 快速內(nèi)切酶PvuII
參考價(jià) | 180 |
參考價(jià):¥ 180
200 rxns
200 rxns | 180元 | 9999件可售 |
更新時(shí)間:2022-08-20 15:59:10瀏覽次數(shù):155評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 儲(chǔ)存條件 | -20℃ |
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產(chǎn)品貨號(hào):F5604s
儲(chǔ)存條件:-20℃
產(chǎn)品組成
組分 | 規(guī)格 |
LabFD™ PvuII | 200ul |
10×LabFD™ Buffer | 2x1ml |
10×LabFD™ Color Buffer | 2x1ml |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
LabFD™快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組、能夠在5~15分鐘內(nèi)精確完成DNA切割的高保真限制性內(nèi)切酶,適用于質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切。LabFD™快速內(nèi)切酶具有如下特點(diǎn):5~15分鐘內(nèi)即可完成酶切;共用一種酶切Buffer,大大簡(jiǎn)化酶切反應(yīng)體系;良好的酶活冗余度,輕松應(yīng)對(duì)底物過量或困難模板酶切。此外,LABLEAD去磷酸化、連接試劑在LabFD™酶切Buffer中具有百分之bai活性,支持一管化反應(yīng),提升“酶切-修飾-連接"的體驗(yàn)。
建議反應(yīng)條件
1×LabFD™緩沖液;
37℃溫育;
參照“DNA快速酶切流程"配制反應(yīng)體系。
失活條件
不可熱失活,請(qǐng)使用酚氯仿抽提或柱純化。
質(zhì)量控制
功能活性檢測(cè)
最shi反應(yīng)溫度下,在20ul反應(yīng)體系中,1ul LabFD™ PvuII能夠在15min內(nèi)*消化1ugλDNA。
超長(zhǎng)時(shí)間溫育檢測(cè)
最shi反應(yīng)溫度下,將1ul LabFD™ PvuII與1ug λDNA共同溫育3h,未檢測(cè)到其他核酸酶污染或星號(hào)活性引起的底物非特異性降解,延時(shí)酶切可能出現(xiàn)星號(hào)活性。
酶切-連接-再酶切檢測(cè)
最shi反應(yīng)溫度下,使用1ul LabFD™ PvuII消化底物,回收酶切產(chǎn)物。在22℃下使用適量Fast T4 DNA Ligase可以將酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后,使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。
非特異性內(nèi)切酶活性檢測(cè)
最shi反應(yīng)溫度下,將1ul LabFD™ PvuII與1ug超螺旋質(zhì)粒DNA共同溫育4h,使用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),質(zhì)粒DNA仍然處于超螺旋狀態(tài)。
使用方法
1.DNA快速酶切流程
1)在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系:
質(zhì)粒DNA | PCR產(chǎn)物 | 基因組DNA | |
ddH2O | 15ul | 16ul | 30ul |
10×LabFD™ Buffer或10×LabFD™ Color Buffer | 2ul | 3ula | 5ul |
底物DNA | 2ul(up to 1ug) | 10ul(~0.2ug) | 10ul(5ug) |
LabFD™ PvuII | 1ul | 1ul | 5ul |
Total | 20ul | 30ul | 50ul |
注:本體系適用于經(jīng)過純化的PCR產(chǎn)物酶切,未純化的PCR具備一定的離子強(qiáng)度,10xLabFDTMbuffer加入量可適當(dāng)減少至2ul。但由于DNA聚合酶同時(shí)具有外切酶活性,會(huì)影響酶切產(chǎn)物,因此如下一步需進(jìn)行克隆等操作,建議酶切前對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化。
2)輕柔吸打或輕彈管壁以混勻(切勿渦旋),然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴;
3)37℃溫育15min(質(zhì)粒),或15~30min(PCR產(chǎn)物),或30~60min(基因組DNA);
4)酚氯仿抽提或柱純化。
2.雙酶切或多酶切
1)每種快速內(nèi)切酶的用量為1ul,并根據(jù)需要適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體系;
2)所有快速內(nèi)切酶的體積總和不得超過總反應(yīng)體系的1/10;
3)如果所用的幾種快速內(nèi)切酶的最shi反應(yīng)溫度不同,應(yīng)先以最shi溫度低的酶開始酶切,再添加最shi溫度較高的酶,在其最shi反應(yīng)溫度下進(jìn)行酶切反應(yīng)。
3.適用于質(zhì)粒的擴(kuò)大反應(yīng)體系
DNA | 1ug | 2ug | 3ug | 4ug | 5ug |
LabFD™ PvuII | 1ul | 2ul | 3ul | 4ul | 5ul |
10×LabFD™ Buffer或10×LabFD™ Color Buffer | 2ul | 2ul | 3ul | 4ul | 5ul |
Total | 20ul | 20ul | 30ul | 40ul | 50ul |
注:如果總反應(yīng)體系大于20ul,應(yīng)適當(dāng)增加溫育時(shí)間,盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。
不同DNA中的酶切位點(diǎn)數(shù)量
λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | M13mp18/19 | Adeno2 |
15 | 0 | 1 | 2 | 2 | 3 | 3 | 24 |
甲基化修飾影響
Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
無影響 | 無影響 | 無影響 | 無影響 | 序列可能重疊 剪切可能受影響 |
在不同反應(yīng)緩沖液中的活性
LabFD™ Buffer | Thermo Scientific FastDigest Buffer | NEB CutSmart®Buffer | Takara QuickCut™Buffer | |
活性 | 百分之bai | 百分之bai | 百分之bai | 百分之bai |
注:活性數(shù)據(jù)來自LABLEAD限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測(cè)。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)