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所有DNA功能都取決于其與特定蛋白質(zhì)的相互作用。這些相互作用可以是非特異性的,也可以是極其特異性的。還有許多可以結(jié)合DNA的酶,其中,在DNA轉(zhuǎn)錄和復(fù)制中復(fù)制DNA序列的聚合酶特別重要。
DNA與組織蛋白的交互作用,這種蛋白質(zhì)中的堿性氨基酸,可與DNA上的酸性磷酸基團(tuán)結(jié)合。
結(jié)合DNA的蛋白質(zhì)
結(jié)構(gòu)蛋白可與DNA結(jié)合,是非專一性DNA-蛋白質(zhì)交互作用的常見例子。染色體中的結(jié)構(gòu)蛋白與DNA組合成復(fù)合物,使DNA組織成緊密結(jié)實(shí)的染色質(zhì)構(gòu)造。對真核生物來說,染色質(zhì)是由脫DNA與一種稱為組織蛋白的小型堿性蛋白質(zhì)所組合而成;而原核生物體內(nèi)的此種結(jié)構(gòu),則摻雜了多種類型的蛋白質(zhì)。
DNA可在組織蛋白的表面上附著并纏繞整整兩圈,以形成一種稱為核小體的盤狀復(fù)合物。組織蛋白里的堿性殘基,與DNA的酸性糖磷酸骨架之間可形成離子鍵,使兩者發(fā)生非專一性交互作用,也使復(fù)合物中的堿基序列相互分離。
在堿性氨基酸殘基上所發(fā)生的化學(xué)修飾有甲基化、磷酸化與乙?;?,這些化學(xué)作用可使DNA與組織蛋白之間的作用強(qiáng)度發(fā)生變化,進(jìn)而使DNA與轉(zhuǎn)錄因子接觸的難易度改變,影響轉(zhuǎn)錄作用的速率。其他位于染色體內(nèi)的非專一性DNA結(jié)合蛋白,還包括一種能優(yōu)先與DNA結(jié)合,并使其扭曲的高移動性群蛋白。這類蛋白質(zhì)可以改變核小體的排列方式,產(chǎn)生更復(fù)雜的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)。
DNA結(jié)合蛋白中有一種專門與單鏈DNA結(jié)合的類型,稱為單鏈DNA結(jié)合蛋白。人類的復(fù)制蛋白A是此類蛋白中獲得較多研究的成員,作用于多數(shù)與解開雙螺旋有關(guān)的過程,包括DNA復(fù)制、重組以及DNA修復(fù)。這類結(jié)合蛋白可固定單鏈DNA,使其變得較為穩(wěn)定,以避免形成莖環(huán)(stem-loop),或是因?yàn)?/span>核酸酶的作用而水解。
相對而言,其他的蛋白質(zhì)則只能與特定的DNA序列進(jìn)行專一性結(jié)合。大多數(shù)關(guān)于此類蛋白質(zhì)的研究集中于各種可調(diào)控轉(zhuǎn)錄作用的轉(zhuǎn)錄因子。這類蛋白質(zhì)中的每一種,都能與特定的DNA序列結(jié)合,進(jìn)而活化或抑制位于啟動子附近序列的基因轉(zhuǎn)錄作用。轉(zhuǎn)錄因子有兩種作用方式,第一種可以直接或經(jīng)由其他中介蛋白質(zhì)的作用,而與負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄的RNA聚合酶結(jié)合,再使聚合酶與啟動子結(jié)合,并開啟轉(zhuǎn)錄作用。第二種則與專門修飾組織蛋白的酵素結(jié)合于啟動子上,使DNA模板與聚合酶發(fā)生接觸的難度改變。
由于目標(biāo)DNA可能散布在生物體中的整個基因組中,因此改變一種轉(zhuǎn)錄因子的活性可能會影響許多基因的運(yùn)作。這些轉(zhuǎn)錄因子也因此經(jīng)常成為信號傳遞過程中的作用目標(biāo),也就是作為細(xì)胞反映環(huán)境改變,或是進(jìn)行分化和發(fā)育時的媒介。具專一性的轉(zhuǎn)錄因子會與DNA發(fā)生交互作用,使DNA堿基的周圍產(chǎn)生許多接觸點(diǎn),讓其他蛋白質(zhì)得以“讀取"這些DNA序列。多數(shù)的堿基交互作用發(fā)生在大凹槽,也就是最容易從外界接觸堿基的部位。
結(jié)合DNA的酶
核酸酶和連接酶:核酸酶是能夠切割DNA鏈的酶,因?yàn)樗鼈兇呋?/span>磷酸二酯鍵的水解。從位于DNA鏈末端的核苷酸開始水解DNA的核酸酶稱為核酸外切酶。另一方面,直接切入DNA鏈的那些是內(nèi)切核酸酶。分子生物學(xué)中使用zuiguang泛的核酸酶,稱為限制性內(nèi)切酶,以切割特定序列的DNA。在自然界中,這種酶通過在進(jìn)入細(xì)菌細(xì)胞時消化噬菌體DNA來保護(hù)細(xì)菌免受噬菌體感染。通常,限制性核酸酶識別特定的回文核苷酸序列,稱為限制性位點(diǎn)。這些酶廣泛用于涉及在載體內(nèi)亞克隆DNA的技術(shù)中。
DNA連接酶:是能夠使用來自ATP或NAD的化學(xué)能將先前切割或斷裂的DNA鏈聚集在一起的酶。連接酶在DNA滯后鏈復(fù)制中特別重要,因?yàn)樗鼈儗樗槠M合成DNA鏈。連接酶在DNA修復(fù)和基因重組中也發(fā)揮重要作用。
拓?fù)洚悩?gòu)酶和解旋酶: 拓?fù)洚悩?gòu)酶是具有活性核酸酶和連接酶的酶。這些酶能夠改變DNA的拓?fù)涮匦?。它們中的一些通過切割DNA螺旋并允許其旋轉(zhuǎn),降低其超螺旋程度,然后通過連接酶將兩端連接。另一方面,其它拓?fù)洚悩?gòu)酶能夠在連接斷裂的DNA鏈之前,切斷螺旋,并允許第二個螺旋通過斷裂部位。拓?fù)洚悩?gòu)酶是許多涉及DNA的過程所必需的,例如DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。解旋酶是能夠利用核苷三磷酸中存在的化學(xué)能的蛋白質(zhì),尤其是ATP,以破壞核堿基之間形成的氫鍵,從而允許DNA的雙螺旋打開成單鏈。
聚合酶:聚合酶是從核苷三磷酸合成多核苷酸鏈的酶。它們通過向鏈上存在的先前核苷酸的3'-OH添加核苷酸起作用。因此,所有聚合酶都以5' - 3'方向起作用。DNA復(fù)制需要DNA依賴的DNA聚合酶,實(shí)現(xiàn)DNA序列的wanmei拷貝。有些DNA聚合酶具有校對功能,能夠檢測含氮堿基之間的錯配錯誤并激活3'或5'外切核酸酶作用以去除不正確的堿基 。 在大多數(shù)生物體中,DNA聚合酶在稱為replisoma的較大蛋白質(zhì)復(fù)合物中起作用,該復(fù)合體由許多酶例如解旋酶組成。 RNA依賴的DNA聚合酶是使用RNA片段作為模板合成DNA的特殊類聚合酶,包括逆轉(zhuǎn)錄酶(一種參與逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的病毒酶)和端粒酶(它是端粒復(fù)制所必需的)。 與DNA依賴性DNA聚合酶一樣,這些RNA依賴的DNA聚合酶也在由輔助分子和調(diào)節(jié)分子組成的廣泛蛋白質(zhì)復(fù)合物中起作用。
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