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細(xì)胞如若在生長(zhǎng)過(guò)程中遇到漂浮困境，你有沒(méi)有想過(guò)會(huì)是操作不當(dāng)？！接下來(lái)，跟隨康康一起，探討這個(gè)非微生物原因?qū)е碌募?xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題，并找到讓它正常發(fā)展的解決方案。

復(fù)蘇后細(xì)胞漂浮原因一：細(xì)胞本身貼壁能力較弱

比如細(xì)胞轉(zhuǎn)染的明星細(xì)胞293T，它生長(zhǎng)較快，但貼壁能力弱，容易出現(xiàn)明顯的成片脫落現(xiàn)象。

293細(xì)胞

∝解決辦法：提前使用明膠包被板子，增強(qiáng)吸附性。另外，還建議使用TC處理（tissue culture treated）的培養(yǎng)瓶/皿促進(jìn)細(xì)胞貼壁附著。

復(fù)蘇后細(xì)胞漂浮原因二：培養(yǎng)基選擇錯(cuò)誤

比如293T細(xì)胞培養(yǎng)，推薦使用的培養(yǎng)基為DMEM（高糖）+10%FBS，但是如果使用RPMI-1640+10%FBS做為培養(yǎng)基，培養(yǎng)液糖分不足，故不夠支持細(xì)胞生長(zhǎng)所需。雖然用錯(cuò)了培養(yǎng)基，但這不代表細(xì)胞一定不能生長(zhǎng)。但如果培養(yǎng)細(xì)胞中長(zhǎng)時(shí)間使用不正確的培養(yǎng)基，甚至缺少必要營(yíng)養(yǎng)組分（例如優(yōu)質(zhì)的血清），那細(xì)胞真的就漂了。

∝解決辦法：參照細(xì)胞使用說(shuō)明書或者實(shí)驗(yàn)室預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，使用合適的培養(yǎng)體系。對(duì)于間充質(zhì)干細(xì)胞這類生存條件苛刻的細(xì)胞，培養(yǎng)基和血清的質(zhì)量要求會(huì)更高。

復(fù)蘇后細(xì)胞漂浮原因三：復(fù)蘇過(guò)程中操作不當(dāng)

復(fù)蘇過(guò)程水溫太低，解凍時(shí)間不足，冰晶損傷了細(xì)胞；水溫太高，燙傷了細(xì)胞。

∝解決辦法：復(fù)蘇細(xì)胞過(guò)程，一般是從液氮罐中取出凍存管，立即放入到37℃水槽中快速解凍，搖晃凍存管，確保在1分鐘內(nèi)完成解凍。

復(fù)蘇后細(xì)胞漂浮原因四：離心對(duì)細(xì)胞造成損傷

去除凍存液中殘留的DMSO過(guò)程，在細(xì)胞復(fù)蘇過(guò)程中，解凍完畢之后，為了防止殘留DMSO對(duì)細(xì)胞的毒性影響，很多小伙伴會(huì)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入到15mL離心管內(nèi)，離心去上清，再重懸細(xì)胞接種培養(yǎng)。但這種情況，會(huì)導(dǎo)致剛復(fù)蘇還極為脆弱的細(xì)胞，因?yàn)殡x心機(jī)的離心力更為脆弱甚至破損死亡。

∝解決辦法：

其實(shí)除了少數(shù)對(duì)DMSO敏感的細(xì)胞之外（例如DMSO誘導(dǎo)HL-60分化成類中性粒細(xì)胞），絕大多數(shù)細(xì)胞應(yīng)在解凍之后，直接接種在培養(yǎng)皿內(nèi)，隔天再更換新鮮培養(yǎng)基去除DMSO。

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