一、tNGS技術(shù)原理
tNGS是一種基于超多重PCR擴(kuò)增（或靶向捕獲）與高通量測序兩種技術(shù)結(jié)合的新一代測序技術(shù)。它使用大量針對(duì)特定基因序列的引物/探針對(duì)待測樣品中抽提出的核酸進(jìn)行超多重PCR擴(kuò)增/探針捕獲，獲得大量目標(biāo)核酸片段，再對(duì)這些目標(biāo)核酸片段進(jìn)行高通量測序，然后對(duì)所得序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)待測樣本中的核酸進(jìn)行高靈敏以及高分辨率的識(shí)別。
二、tNGS優(yōu)點(diǎn)
1. 針對(duì)性強(qiáng)：tNGS只針對(duì)特定基因序列進(jìn)行測序，因此可以大大減少測序數(shù)據(jù)量，提高檢測效率和準(zhǔn)確性。
2. 高靈敏度：由于tNGS可以對(duì)低濃度的病原微生物進(jìn)行檢測，因此具有高靈敏度。
3. 高分辨率：tNGS能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)病原體特定基因的高分辨率識(shí)別，有助于精準(zhǔn)診斷。
4. 成本低：與mNGS相比，tNGS的測序數(shù)據(jù)量更少，因此成本更低。
三、tNGS缺點(diǎn)
1. ?漏檢非靶向基因?：tNGS技術(shù)只能檢測預(yù)設(shè)的目標(biāo)序列，無法檢測非預(yù)設(shè)的病原體。
2. ?文庫制備復(fù)雜?：文庫制備過程需要更多的時(shí)間和試劑，且操作較為復(fù)雜。
四、tNGS應(yīng)用場景
1. ?感染性疾病診斷?：tNGS技術(shù)能夠快速、準(zhǔn)確地檢測臨床樣本中的多種病原微生物，特別是對(duì)低濃度的病原微生物及其毒力和耐藥基因的檢測具有顯著優(yōu)勢。這種方法不依賴于傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)，直接對(duì)樣本中的幾十種至幾百種已知病原微生物及其毒力和/或耐藥基因進(jìn)行富集，再進(jìn)行高通量測序，然后與數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì)分析，從而提供客觀的診斷依據(jù)?。
2. ?耐藥結(jié)核病檢測?：tNGS技術(shù)在耐藥結(jié)核病檢測中表現(xiàn)出色。世界衛(wèi)生組織（WHO）發(fā)布的報(bào)告指出，tNGS技術(shù)能夠有效檢測結(jié)核分枝桿菌的耐藥性，具有較高的診斷準(zhǔn)確性和成本效益。盡管傳統(tǒng)分子診斷技術(shù)已廣泛應(yīng)用，但tNGS技術(shù)提供了更全面的檢測范圍，解決了部分藥物檢測的盲區(qū)，特別是在多耐藥結(jié)核病的判定上具有顯著優(yōu)勢?。
3.?呼吸道病原體檢測?：tNGS技術(shù)也被應(yīng)用于呼吸道病原體的檢測。例如，精準(zhǔn)分子醫(yī)學(xué)中心開展的呼吸道病原體靶向測序（tNGS）檢測項(xiàng)目，能夠覆蓋常見的呼吸道病原微生物，包括細(xì)菌、病毒、真菌等，輔助指導(dǎo)臨床用藥。該技術(shù)不僅提高了診斷的準(zhǔn)確性，還提供了耐藥基因的檢測報(bào)告，有助于精準(zhǔn)治療。
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