你知道細(xì)胞胞內(nèi)染色操作流程是什么嗎？讓我們一起來看看吧！
一、細(xì)胞計(jì)數(shù)
將培養(yǎng)好的細(xì)胞收集于15mL離心管并計(jì)數(shù)；500g離心4min，去上清。
二、制備單細(xì)胞懸液
將收集的細(xì)胞用1mL 0.5%BSA/PBS溶液重懸，400g離心3min，去上清，重復(fù)2次；用0.5%BSA/PBS溶液重懸細(xì)胞至濃度1x106個(gè)細(xì)胞/mL，分配到96孔板中，每孔100μl細(xì)胞懸液，400g離心5min去上清。
三、固定
每孔加入100μl細(xì)胞固定劑重懸細(xì)胞，2-8°孵育20min。
四、洗滌
400g離心5min，去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸，離心去上清，重復(fù)兩遍。
每孔加入100μl細(xì)胞通透劑重懸細(xì)胞，室溫孵育20min。
400g離心5min，去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸，離心去上清，重復(fù)兩遍。
五、阻斷Fc受體
10-20min。
六、一抗孵育
每孔加入稀釋后的一抗溶液100μl，2-8℃反應(yīng)30min。
七、洗滌
400g離心5min，去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸，離心去上清，重復(fù)兩遍。
八、二抗孵育
對(duì)于非熒光染料直標(biāo)抗體，加入100μl熒光二抗重懸，避光2-8℃反應(yīng)30min。對(duì)于直標(biāo)抗體直接跳到步驟九。
九、洗滌
400g離心5min，去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸，離心去上清，重復(fù)兩遍。
十、上機(jī)分析
用200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸細(xì)胞，4℃保存，上機(jī)分析。
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