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什么是熒光原位雜交？

閱讀：664 發(fā)布時間：2023-8-23
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熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一門新興的分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，是 20 世紀(jì) 80 年代末期在原有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性原位雜交技術(shù)。目前這項技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于動植物基因組結(jié)構(gòu)研究、染色體精細(xì)結(jié)構(gòu)變異分析、病毒感染分析、人類產(chǎn)前診斷、腫瘤遺傳學(xué)和基因組進化研究待許多領(lǐng)域。FISH的基本原理是用已知的標(biāo)記單鏈核酸為探針，按照堿基互補的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進行異性結(jié)合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。由于 DNA 分子在染色體上是沿著染色體縱軸呈線性排列，因而可以探針直接與染色體進行雜交從而將特定的基因在染色體上定位。與傳統(tǒng)的放射性標(biāo)記原位雜交相比，熒光原位雜交具有快速、檢測信號強、雜交特異性高和可以多重染色等特點，因此在分子細(xì)胞遺傳學(xué)領(lǐng)域受到普遍關(guān)注。
雜交所用的探針大致可以分類三類：
1）染色體特異重復(fù)序列探針，例如 α 衛(wèi)星、衛(wèi)星 III類的探針，其雜交靶位常大于 1Mb，不含散在重復(fù)序列，與靶位結(jié)合緊密，雜交信號強，易于檢測；
2）全染色體或染色體區(qū)域特異性探針，其由一條染色體或染色體上某一區(qū)段上極duan不同的核苷酸片段所組成，可由克隆到噬菌體和質(zhì)粒中的染色體特異大片段獲得；
3）特異性位置探針，由一個或幾個克隆序列組成。
探針的熒光素標(biāo)記可以采用直接和間接標(biāo)記的方法。間接標(biāo)記是采用生物素標(biāo)記DNA探針，雜交之后用藕聯(lián)有熒光素親和素或者鏈霉親和素進行檢測，同時還可以利用親和素-生物素-熒光素復(fù)合物，將熒光信號進行放大，從而可以檢測 500bp 的片段。而直接標(biāo)記法是將熒光素直接與探針核苷酸或磷酸戊糖骨架共價結(jié)合，或在缺口平移法標(biāo)記探針時將熒光素核苷三磷酸摻入。直接標(biāo)記法在檢測時步驟簡單，但由于不能進行信號放大，因此靈敏度不如間接標(biāo)記的方法。
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