第0天：細胞接種
→根據(jù)下表在V mL細胞生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)種子細胞
每個孔、盤子或燒瓶的數(shù)量
*對于特定的細胞類型或懸浮細胞，請參考完整的方案。
第1天：轉(zhuǎn)染
→在血清存在的情況下進行轉(zhuǎn)染
→僅使用jetPRIME®緩沖液
→以60-80%的融合率轉(zhuǎn)染細胞
每個孔、盤子或燒瓶的數(shù)量
第2-3天：測量基因表達
優(yōu)化方向：
(1)測試不同的DNA量：X、0.5X和1.5X。
(2)測試不同的DNA/jetPRIME®比例，1:2至1:3。
每個孔、盤子或燒瓶的數(shù)量
對于HEK-293和HeLa細胞，可以將DNA量減少到0.5倍，并使用1:2 DNA/jetPRIME®比例。
提高敏感細胞細胞活力的技巧：
（1）轉(zhuǎn)染后4小時更換培養(yǎng)基。
（2）將DNA量減少到0.5倍，同時保持之前使用的DNA/jetPRIME®比例。
（3）在較早的時間點（例如轉(zhuǎn)染后24小時而不是48小時）分析轉(zhuǎn)染。
（4）檢查靶基因是否影響細胞活力。
良好的DNA轉(zhuǎn)染實踐：
（1）適當儲存jetPRIME®（5±3°C）。
（2）確保細胞在轉(zhuǎn)染前傳代兩次以上且少于20次。
（3）丟棄過度流暢的細胞。
（4）定期檢查支原體污染情況。
（5）使用報告基因來建立和優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。
（6）血清質(zhì)量可能會嚴重影響轉(zhuǎn)染效率。購買新一批血清時或胰蛋白酶檢查細胞活力以及轉(zhuǎn)染效率。
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