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貨物所在地:上海上海市
所在地: 上海
更新時(shí)間:2024-10-26 13:59:14
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T-47D 人乳腺管癌細(xì)胞
Product Format: a T25 flask
Culture Properties:貼壁
Complete Growth Medium: H-DMEM+10%FBS+1%雙抗
Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
Application: Cells and cancer research
NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.
Components
Item | Specifications |
a T25 flask | 2X106 |
Manual | 1 copy |
細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟
吸走多余培養(yǎng)基,加入3-5mL PBS后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞;
吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰-酶-0.53mM EDTA,輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰-酶浸沒(méi)細(xì)胞表面,培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化;
(細(xì)胞對(duì)于消化比較敏感,消化過(guò)度會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài),導(dǎo)致細(xì)胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長(zhǎng)。細(xì)胞消化到細(xì)胞間隙變大但未脫落,可以輕輕吹下時(shí)即可終止,禁止消化到細(xì)胞*漂浮?;靹蚣?xì)胞時(shí)盡量輕柔,不要吹出大量氣泡。)
加入6-8ml*培養(yǎng)基終止消化,輕輕吹下細(xì)胞混勻;
將混勻的細(xì)胞1000rpm(約150g)離心3min,棄上清,再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)(建議T25瓶加10-12ml*培養(yǎng)基,10cm皿加12-15ml);
傳代比例: 不同細(xì)胞生長(zhǎng)速度不一,具體傳代比例視細(xì)胞生長(zhǎng)速度而定,大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代,生長(zhǎng)較慢的細(xì)胞可以1:2傳代。
細(xì)胞冷凍保存
1.凍存液:92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件自行選擇)
2.降溫步驟:4度10min,-20度2h,-80過(guò)夜后液氮保存。
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