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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 96T/48T |
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貨號 | YLK-5693E | 應用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 科研實驗 | 樣本 | 血清、血漿及相關(guān)液體樣本 |
適用物種 | 人、大鼠、小鼠、植物、動物等 | 檢測方法 | 雙抗體夾心法 |
保存條件 | 2-8℃ | 有效期 | 6個月 |
人囊蟲IgG抗體(CYT-IgG)ELISA試劑盒
(ELISA) 使用說明書
?人囊蟲IgG抗體(CYT-IgG)ELISA試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中囊蟲IgG抗體(CYT-IgG)表達。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人囊蟲IgG抗體(CYT-IgG)表達。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中囊蟲IgG抗體(CYT-IgG)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經(jīng)過徹di洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中人囊蟲IgG抗體(CYT-IgG)的存在與否。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標準品(400pg/ml) | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
計算和結(jié)果判定:
試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20
臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為犬細粒棘球絳蟲抗原(Eg Ag)陰性
陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為犬細粒棘球絳蟲抗原(Eg Ag)陽性。
注意事項
1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請避光保存。
6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:2-8℃。
2.有效期:12個月