大鼠外周血中性粒細胞
產(chǎn)品名稱 ：大鼠外周血中性粒細胞
產(chǎn)品貨號 ：YLK-XB1207h
組織來源 ：外周血
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介：
外周血中性粒細胞分離自外周血。外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中首ci提出外周血這一新概念。白細胞是一類無色、球形、有核的血細胞。白細胞不是一個均一的細胞群，根據(jù)其形態(tài)、功能和來源部位可以分為三大類 ：粒細胞、單核細胞和淋巴細胞，其中粒細胞又可根據(jù)胞質(zhì)中顆粒的染色性質(zhì)不同，分為中性粒細胞、嗜酸粒細胞和嗜堿粒細胞三種。
中性粒細胞是在瑞氏(W right) 染色血涂片中，胞質(zhì)呈無色或極淺的淡紅色，有許多彌散分布的細小的(0. 2～0. 4微米) 淺紅或淺紫色的te有顆粒。細胞核呈桿狀或2～5分葉狀，葉與葉間有細絲相連。中性粒細胞具趨化作用、吞噬作用和殺菌作用。中性粒細胞來源于骨髓，具有分葉形或桿狀的核，胞漿內(nèi)含有大量既不嗜堿也不嗜酸的中性細顆粒。這些顆粒多是溶酶體，內(nèi)含髓過氧化酶、溶菌/酶、堿性磷酸酶和酸性水解酶等豐富的酶類，與細胞的吞噬和消化功能有關(guān)。
中性粒細胞在血液的非特異性免疫中起著十分重要的作用，它處于機體抵御微生物病原體，特別是在化膿性細菌入侵的第一線，具有很強的吞噬活性，可吞噬細菌、衰老的紅細胞、抗原一抗體復(fù)合物和壞死的細胞等。中性粒細胞內(nèi)含有大量溶酶體酶，因此能將吞噬入細胞內(nèi)的細菌和組織碎片徹di分解。當中性粒細胞吞噬數(shù)十個細菌后，自身發(fā)生解體，所釋出的各種溶酶體酶類能溶解周圍組織而形成膿液。中性粒細胞是人體內(nèi)壽命最短的細胞，一般體外培養(yǎng)12-24h內(nèi)活性穩(wěn)定，48h活性下降，96h基本死亡。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：懸浮
細胞形態(tài) ：圓形
傳代特性 ：不增殖。不傳代
傳代比例 ：不傳代
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 ：氣相 ：空氣，95% 。C O2，5%
該細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白/酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完培至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清，用5ml完培基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰/酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和公司技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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