人胰腺癌組織源星狀細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 ：人胰腺癌組織源星狀細(xì)胞
產(chǎn)品貨號(hào) ：YLK-XB0718h
組織來(lái)源 ：胰腺癌組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
胰腺癌組織源星狀細(xì)胞分離自患有胰腺癌病人的胰腺癌組織。胰腺癌是一種惡性程度很高，診斷和治療都很困難的消化道惡性腫瘤，約90% 為起源于腺管上皮的導(dǎo)管腺癌。其發(fā)病率和死亡率近年來(lái)明顯上升。5年生存率< 1% ，是預(yù)后最差的惡性腫瘤之一。胰腺癌早期的確診率不高，手術(shù)死亡率較高，而治yu率很低。胰腺癌的病因尚不十分清楚。其發(fā)生與吸煙、飲酒、高脂肪和高蛋白飲食、過(guò)量飲用咖啡、環(huán)境污染及遺傳因素有關(guān)。
近年來(lái)的調(diào)查報(bào)告發(fā)現(xiàn)糖尿病人群中胰腺癌的發(fā)病率明顯高于普通人群。也有人注意到慢性胰腺炎病人與胰腺癌的發(fā)病存在一定關(guān)系，發(fā)現(xiàn)慢性胰腺炎病人發(fā)生胰腺癌的比例明顯增高。另外還有許多因素與此病的發(fā)生有一定關(guān)系，如職業(yè)、環(huán)境、地理等。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，大部分癌癥的生存率都在提高，例如乳腺癌，結(jié)直腸癌等腫瘤，近幾十年來(lái)，生存率得到了大幅度的提升。但胰腺癌的生存率一直停滯不前，缺乏有效的治療方法，ji高的死亡率使其成為“癌中zhi王"，近年來(lái)胰腺癌微環(huán)境的研究引起了諸多學(xué)者的重視。胰腺癌微環(huán)境構(gòu)成復(fù)雜，其中，胰腺星狀細(xì)胞是胰腺癌微環(huán)境中最重要的間質(zhì)細(xì)胞之一，在胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移、侵襲、血管生成、免疫逃逸、轉(zhuǎn)移及化/療耐藥中發(fā)揮重要的作用。
因此針對(duì)胰腺星狀細(xì)胞和胰腺癌細(xì)胞相互作用的研究有望提高胰腺癌患者的預(yù)后。胰腺星狀細(xì)胞(p an creatic stellate cells,PSC )是一種胰腺特異性間質(zhì)細(xì)胞，多在胰腺組織內(nèi)血管和導(dǎo)管周圍聚集，環(huán)繞在腺泡的基底部位，正常靜比狀態(tài)下只占胰腺細(xì)胞的4% 左右，細(xì)胞質(zhì)中含有豐富的維生素A 脂滴，以表達(dá)膠質(zhì)纖絲酸性蛋白質(zhì)(glialfilam entacidic protein,G FA P )、結(jié)合蛋白(D esmin)為特征。在胰腺組織損傷、應(yīng)激等條件下PSC 被激活，成為一種肌成纖維細(xì)胞，胞質(zhì)中富含維生素A 的脂滴消失，以表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-sm oothm uscle actin,α -SM A )為標(biāo)志，能大量合成細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularm atrix,ECM )和分泌多種細(xì)胞因子。
胰腺癌微環(huán)境中存在大量激活的PSC，在胰腺癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。PSC 通過(guò)誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞(pancreatic cancercells,PC C )上皮一間質(zhì)轉(zhuǎn)變(epithelial-m esenchym altran sition,EM T)促進(jìn)胰腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移侵襲和轉(zhuǎn)移是腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)腫瘤灶到達(dá)靶器官的一個(gè)多步驟過(guò)程，眾多研究表明EM T與胰腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。EM T最主要的特征是上皮細(xì)胞特征丟失同時(shí)伴間質(zhì)細(xì)胞特征獲得，如E一鈣茹蛋白(E-cadherin)表達(dá)下降，波形蛋白(Vim entin )表達(dá)上調(diào)。karn evi等研究發(fā)現(xiàn)，PSC 與PC C 共培養(yǎng)后能夠誘導(dǎo)PC C 上皮性細(xì)胞標(biāo)志(E-cadherin,β -catenin)丟失，促進(jìn)間質(zhì)性細(xì)胞標(biāo)志(Vim entin,Snai-1）獲得，表明PSC 在PC C 的EM T 形成過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用。PSC 參與胰腺癌進(jìn)展的各個(gè)環(huán)節(jié)，而PSC 活化是PSC 發(fā)揮功能的重要部分。因此，如能抑制PSC 活化或控制PSC 細(xì)胞功能將為胰腺癌綜合/治療提供潛在的治療策略。因此，隨著針對(duì)抑制PSC活化或其功能的研究的深入，有望從胰腺癌微環(huán)境角度切實(shí)提高胰腺癌的綜合/治療效果。
質(zhì)量檢測(cè)
優(yōu)利科生物實(shí)驗(yàn)室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS、EG F、Insulin、Penicillin、Streptom ycin等
生長(zhǎng)特性 ：貼壁
細(xì)胞形態(tài) ：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 ：可傳2-3代
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 ：氣相：空氣，95% 。C O2，5%
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白/酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完培至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清，用5ml完培基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。
4) 待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中，胰/酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和公司技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決
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