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| 純度 | 100 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
|---|---|---|---|
| 規(guī)格 | 50T | 貨號 | YLK10046P |
| 應用領域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) | 主要用途 | 科研 |
| 英文名稱： | Sheeppox?Virus(SPPV) | 運輸： | 低溫 |
| 保存： | -20℃ | 有效期： | 1年 |
產(chǎn)品名稱：
商品名稱：綿羊痘病毒PCR試劑盒
Name：Sheeppox Virus(SPPV) PCR試劑盒
包裝規(guī)格：50T/盒
預期用途
綿羊痘是由羊痘病毒屬中綿羊痘病毒（Sheep pox virus, SPV）引起羊的一種急性、熱性、接觸性傳染病，被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為需通報傳染病，我國列為一類動物疾病。該病主要表現(xiàn)為體溫升高，皮膚、黏膜、內(nèi)臟器官表面發(fā)生廣泛性的丘疹、皰疹或結節(jié)，淋巴結腫大，病畜消瘦，毛的品質(zhì)下降，產(chǎn)乳量大幅度降低，嚴重時導致死亡。羊痘分布廣泛，世界各國具有本病爆發(fā)和流行的相關報道，中東、非洲北部及中部、亞洲流行尤為嚴重。
本試劑盒適用于檢測綿羊皮膚病變組織、淋巴結、水泡液等樣本中的綿羊痘病毒，用于綿羊痘病毒感染的輔助診斷。
檢驗原理：
綿羊痘病毒PCR試劑盒采用 TaqMan 探針法實時熒光 PCR 技術，設計一對綿羊痘病毒特異性引物，結合一條特異性探針， 用熒光 PCR 技術對綿羊痘病毒的 DNA 進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染病料的病原學診斷。
試劑組成：
包裝規(guī)格 | 50T/盒 |
SPV 反應液 | 500μL×2 管 |
酶液 | 50μL×1 管 |
SPV 陽性質(zhì)控品 | 50μL ×1 管 |
陰性質(zhì)控品 | 250μL ×1 管 |
說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
儲存條件及有效期：
-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個月。
適用儀器：
ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
標本采集：
綿羊皮膚病變組織、淋巴結 5g；水泡液取 1mL。
保存和運輸：
采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應不超過 24 h；若需長期保存，應放置-70℃以下保存，凍融不超過 3 次。
使用方法：
1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1 樣本前處理
組織樣品：每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g，手/術/剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于1.5mL 滅菌離心管中；咽/拭子樣品直接取 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。
1.2 核酸提取
推薦采用優(yōu)利科（上海）生命科學有限公司生產(chǎn)的核酸/提取/或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取，請按照試劑說明書進行操作。
2. 試劑配制（試劑準備區(qū)）
根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設所需要的 PCR 反應管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿
10 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：
試劑 | SPV 反應液 | 酶液 |
用量 | 19μL | 1μL |
將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中，20μL/管。
3. 加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟 1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 5μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻， 短暫離心。
4. PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）
4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內(nèi)；
4.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25μL；
熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇
ROX 參比熒光，選擇 None 即可。
4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設置：
步驟 | 循環(huán)數(shù) | 溫度 | 時間 | 收集熒光信號 |
1 | 1 cycle | 95℃ | 2min | 否 |
2 | 45 cycles | 95℃ | 15sec | 否 |
60℃ | 30sec | 是 |
5. 結果分析判定
5.1 結果分析條件設定（請參照各儀器使用說明書進行設置，以分析 ABI7500 儀器為例）
反應結束后自動保存結果，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據(jù)實際情況自行調(diào)整，Start 值可設在 3～15、End 值可設在 5～20，使閾值線位于擴增曲線指數(shù)期，陰性質(zhì)控品的擴增曲線平直或低于閾值線），點擊 Analyze 自動獲得分析結果。
5.2 結果判斷
陽性：檢測通道 Ct 值≤40，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線； 陰性：樣本檢測結果 Ct 值>40 或無 Ct 值。
5.3 質(zhì)控標準
陰性質(zhì)控品：無特異性擴增曲線或無 Ct 值顯示；
陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)增長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。
6.檢測方法的局限性
1. 樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關；
2. 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結果；
3. 陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏，會導致假陽性結果；
4. 病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；
5. 不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；
6. 試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結果；
7. 本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。
【注意事項】
1. 所有操作嚴格按照說明書進行；
2. 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應自然融化，wan全混勻并短暫離心；
3. 反應液應避光保存；
4. 反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
5. 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；
6. 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；
7. 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；
8. 試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。
【參考文獻】
[1] 康文玉, 徐自忠, 高洪等. 羊痘病毒[J]. 中國畜牧獸醫(yī), 2004, 31(12)：33-36.
[2] 陳軼霞. 羊痘診斷技術研究進展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學, 2008, 36(34)：15008-15009.
[3] 國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局. SN/T 2452-2010 綿羊痘和山羊痘檢疫技術規(guī)范[S].
[4] 李楊, 于少雄, 顏新敏, 等. 綿羊痘病毒 TaqMan-MGB 熒光定量 PCR 快速檢測方法的建立[J]. 中國預防獸醫(yī)學報, 2016.
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