生物污染簡介：
細胞培養(yǎng)物污染往往是細胞培養(yǎng)實驗室常遇到的問題，有時會帶來十分嚴重的后果。
細胞培養(yǎng)污染物主要分為兩類。
一是化學污染物，例如：培養(yǎng)基、血清和水中的雜 質、內毒素、增塑劑和去污劑，
二是生物污染物，例如：細菌、霉菌、酵母、病 毒、支原體以及其他細胞系的交叉污染。盡管無法*消除污染，但是可以通過充分了 解污染源以及采用良好的無菌技術，降低污染發(fā)生的頻率和嚴重程度。此部分將概括介紹主要的幾種生物污染。
細菌：
細菌是一大類廣泛存在的單細胞微生物。細菌直徑一般為幾個微米，外形多樣，例如：球狀、桿狀和螺旋狀。細菌由于分布廣泛、生長迅速以及體積大小的特點，與酵母和霉菌一起構成了細胞培養(yǎng)中常遇到的生污染物。培養(yǎng)物被細菌污染后，幾天內即可通過簡單的肉眼觀察發(fā)現(xiàn)；被感染的培養(yǎng)物通常呈云霧狀（即：渾濁狀），有時表面會覆蓋一 層薄膜。另外，經常還會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基的pH值突然降低。在低倍顯微鏡下可見，細菌為細 胞之間移動的微小顆粒，在高倍顯微鏡下觀察可以分辨出各個細菌的形狀。下列模擬圖像顯示了貼壁生長的293細胞被大腸桿菌污染。
酵母：
酵母是真菌界的一種單細胞真核微生物，大小從數(shù)微米（多見）到40微米（罕見）不等。 與細菌污染類似，培養(yǎng)物被酵母污染后也會變得渾濁，特別是進入污染后期時。培養(yǎng)物 -被酵母污染后pH值變化極小，污染嚴重時pH值才會升高。在顯微鏡下，酵母呈單個卵圓形或球形顆粒，有些會芽生出較小的顆粒。下列模擬圖像顯示了貼壁生長的293細胞接種24小時后被酵母感染。
霉菌：
霉菌是真菌界的一種真核微生物，以被稱為菌絲的多細胞絲狀體形式生長。這些多細胞絲狀體構成的交聯(lián)網絡含有遺傳性相同的細胞核，被稱為集落或者菌絲體。與酵母污染類似，霉菌污染初期培養(yǎng)物pH值會維持穩(wěn)定，污染加重后pH值會迅速升高，導致培養(yǎng)物渾濁。在顯微鏡下，菌絲體通常呈細束狀纖維，有時呈較為密集的抱子團塊。許多種霉菌的抱子在休眠期均可耐受極-端嚴峻、不利的環(huán)境，當其遇到合適的生長條件時才會 被活化。
病毒：
病毒是一種微觀感染性物質，利用宿主細胞結構進行復制。病毒體積極小，因而要檢測培養(yǎng)物中有無病毒以及將其從細胞培養(yǎng)實驗室所用試劑中去除都十分困難。由于大多數(shù) 病毒對宿主有非常嚴格的要求，因此一般不會對與其宿主物種不同的細胞培養(yǎng)物造成不良影響。但是，使用病毒感染的細胞培養(yǎng)物時卻會對實驗室工作人員造成嚴重的健康威 脅，特別是當實驗室培養(yǎng)的是人或靈長類動物細胞時。通過電子顯微鏡檢查、一組抗體的免疫染色、ELISA實驗或者采用適當病毒引物的PCR技術可以檢測出細胞培養(yǎng)物的病毒污染。
支原體：
支原體是一種沒有細胞壁的簡單細菌，被認為是能夠自我復制的最小的生物。由于體積 極?。ㄒ话阈∮?微米），支原體的檢測十分困難，除非其達到極-高的密度，導致細胞培 養(yǎng)物變質，在此之前往往沒有明顯的感染征象。有些生長緩慢的支原體可能會在培養(yǎng)物中持續(xù)存在，而不會導致細胞死亡，但是這些支原體會改變培養(yǎng)體系中宿主細胞的行為和代謝。慢性支原體感染的可能表現(xiàn)包括：細胞增殖速度降低、飽和密度下降以及懸浮培養(yǎng)物凝集；但是，唯-一切實有效的檢測支原體污染的方法就是采用熒光染色、ELISA、PCR、免疫染色、放射自顯影或者微生物學測定技術定期檢 測培養(yǎng)物。
交叉污染：
雖然不如微生物污染普遍，但是許多細胞系與HeLa細胞及其他生長迅速的細胞系間廣泛的交叉污染是一個明確的問題，會造成嚴重的后果。從聲譽好的細胞庫獲取細胞系、定期檢查細胞系的性質以及采用良好的無菌技術是有助于避免交叉污染的慣例方法。通過 DNA指紋圖譜、核型分析和同位素分析可以確認細胞培養(yǎng)物有無交叉污染。
抗生素的使用：
細胞培養(yǎng)時不應常規(guī)使用抗生素，因為連續(xù)使用抗生素會促進抗生素耐藥性細胞株的產生，導致輕度污染持續(xù)存在。一旦將抗生素從培養(yǎng)基中去除，這種輕度污染最終將發(fā)展成大規(guī)模污染，而且連續(xù)使用抗生素還會掩蓋支原體感染及其他隱性污染。另外，有些抗生素會與細胞發(fā)生交叉反應，干擾您研究的細胞過程。
抗生素只能作為對付污染的最后手段而且只能短期使用，并應盡快撤除。如果長期使用 抗生素，則應同時進行無抗生素培養(yǎng)，以便作為鑒別隱性感染的對照。
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