使用方法
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。 由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能 污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本 產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對(duì)照。
1.標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2，1。
2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭， 下同。
3. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震 蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所 得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 4 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所 得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E4 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 如果有 N 個(gè)樣品待提取，最好設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的是 PC（樣品制備陽 性對(duì)照）和 NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢匀￡栃詫?duì)照的 1000 倍稀釋液 10μL 再加上一定量的水，使總體積與待提取樣品的規(guī)定體積一致，以此作 為 PC。另外用水作為 NC。
8. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù) DNA 提取試劑盒兼 容。
三、Probe qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9.如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè) 用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用 水做模板），1 個(gè)用于 PCR 陽性對(duì)照（用第 4 號(hào)管的陽性對(duì)照稀釋液做模 板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè) 置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照，并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好 后最后加）
| 成分/每管 | 樣品管 N+2 個(gè) | PCR 陰性 對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管（1-6 管） |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 10 μL |
| 榛子源性成分探針法 qPCR 引物-探針混合液 | 3 μL | 3 μL | 3 μL |
| N+2 個(gè)待測(cè) DNA 模板 | 7 μL | ||
| 超純水 | 7 μL | ||
| 第 6 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液 （1-6 號(hào)） | 7 μL（1 號(hào)樣到 1 號(hào)管，2 號(hào)樣到 2 號(hào)管…） |
11. 蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR：
| 過程 | 溫度 | 時(shí)間 |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 10 min |
| PCR 反應(yīng) （45 個(gè)循環(huán)） | 95℃ | 15 sec |
| 60℃ | 60 sec（采集 FAM 通道的熒 光信號(hào)） |
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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