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          尿酸(Uric Acid, UA)含量測定試劑盒說明書

          閱讀:1713      發(fā)布時(shí)間:2023-11-08
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          尿酸(Uric Acid, UA)含量測定試劑盒說明書


          微量法 100T/96S


          注 意:正式測定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。


          測定意義:


          UA 是鳥類和爬行類動(dòng)物的主要代謝產(chǎn)物,正常人體尿液中產(chǎn)物主要為尿素,含少量尿酸。此外,UA 還是重要的抗氧化劑,能清除超氧化物,羥自由基等。體內(nèi) UA 生成量和排泄量不平衡會(huì)導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。例如,血中 UA 升高會(huì)引起痛風(fēng)、腎功能損害和動(dòng)脈硬化,相反 UA 降低會(huì)引起惡性貧血,在臨床診斷上具有重要的意義。



          測定原理:


          尿酸酶能催化 UA 生成尿囊素,CO2 及 H2O2,H2O2 氧化亞鐵氰hua鉀中的 Fe2+ 生成 Fe3+ ,F(xiàn)e3+進(jìn)一步與酚和 4-氨基安替比林縮合生成紅色醌類化合物,在 505nm 下有特征吸收峰,測定反應(yīng)體系 505nm 的吸收值,可計(jì)算尿酸的含量。



          自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:


          恒溫水浴鍋、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。



          試劑組成和配制:


          緩沖液:液體 20mL×1 瓶,4℃保存。


          試劑一:


          A:用于標(biāo)準(zhǔn)管和測定管,粉劑 1 瓶,4℃避光保存,使用前加 13mL 緩沖液溶解。


          B:用于空白管,粉劑 1 瓶,4℃避光保存,使用前加 7 mL 緩沖液溶解。


          試劑二:粉劑 1 管,4℃避光保存,使用前加 2mL 蒸餾水溶解,60℃加熱溶解。



          樣品的制備:


          1.        動(dòng)植物組織:建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 生理鹽水或蒸餾水,進(jìn)行冰浴勻漿,然后 8000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。


          2.        血清,培養(yǎng)液:直接檢測。


          測定操作表:


          1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 505nm。


          2、 操作表


          標(biāo)準(zhǔn)管

          空白管

          測定管





          試劑一(μL)

          A, 60

          B, 60

          A, 60





          H2O(μL)

          180

          240

          180





          試劑二(μL)

          60







          樣品(μL)



          60






          混勻,37℃水浴 30min,取 200µL 于微量石英比色皿/96 孔板中,測定 505nm 處各管吸光值,標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管。


          UV 含量計(jì)算公式:


          1.    組織:


          (1)按樣本重量計(jì)算


          尿酸含量(μmol/g 鮮重)=C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷(W÷V樣總)=0.5×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷W

          (2)按樣本蛋白濃度計(jì)算


          尿酸含量(μmol/mg prot)=C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷ Cpr =0.5×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷Cpr


          尿酸(μmol/L)= C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×103 =500×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)


          C   標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)品濃度 0.5μmol/mL;V 樣總:加入提取液體積,1mL;W:樣品質(zhì)量,g ;Cpr:


          樣本蛋白濃度,mg/mL;103  :1μmol/ L=103μmol/ mL


          注意事項(xiàng):


          1.    血清樣本請?jiān)?24 小時(shí)內(nèi)測定,或者 4℃密封避光保存不超過 72 小時(shí)。


          2.    吸光值大于 0.8 可用蒸餾水稀釋樣本,并在計(jì)算公式中算入稀釋倍數(shù)。


          3.    z低檢出限為 10μmol/L。



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          優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司

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