土壤中性木聚糖酶（Soil Neutral Xylanase，S-NEX）測定
試劑盒說明書
微量法100T/48S
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中，NEX一般分離自最適生長pH為6-8的微生物。
測定原理：
NEX在中性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進一步與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在540nm處有特征吸收峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過測定反應(yīng)液在540nm吸光值增加速率，可計算NEX活力。
自備實驗用品及儀器：
天平、常溫離心機、震蕩儀、恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板。
試劑組成和配制：
緩沖液：液體10mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體3mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。
樣品處理：
新鮮土樣風干，過30-50目篩。
測定操作表：
1、 分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至540nm。
2、 操作表
對照管 | 測定管 | |
土樣（g） | 0.02 | 0.02 |
緩沖液（μL） | 150 | 100 |
試劑一（μL） | 50 | |
混勻，50℃震蕩反應(yīng)30min，立即90℃水浴10min，8000g，25℃離心10min，取上清100μL | ||
試劑二（μL） | 100 | 100 |
混勻，90℃水浴中顯色5min，取180μL于微量石英比色皿/96孔板測定540nm處吸光值A，分別記為A對照管、A測定管，△A=A測定管-A對照管。 | ||
S-NEX計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y = 1.6904x + 0.0058，R2 = 0.9989
酶活定義：50℃，pH6.0條件下，每克土壤每天分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的酶量為一個酶活單位。
S-NEX活力（μmol/d/g土樣）=（△A-0.0058）÷ 1.6904×V反總×103÷ W÷T÷ 150
= 28.4×（△A -0.0058）÷ W
V反總：反應(yīng)總體積，0.15mL；T：反應(yīng)時間，1/48d；1000：1mmol/L =103μmol/L；150：木糖分子量。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y = 0.8452x + 0.0058，R2 = 0.9989
酶活定義：50℃，pH6.0條件下，每克土壤每天分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的酶量為一個酶活單位。
S-NEX活力（μmol/d/g土樣）=（△A-0.0058）÷ 0.8452×V反總×103÷ W÷T÷ 150
= 56.8×（A540-0.0058）÷ W
V反總：反應(yīng)總體積，0.15mL；T：反應(yīng)時間，1/48d；1000：1mmol/L =103μmol/L；150：木糖分子量。
注意事項：
1. 保證震蕩反應(yīng)30min，使酶與底物充分接觸。
2. 注意90℃水浴防止爆開，以免改變反應(yīng)體系。
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