水土亞硝酸鹽含量測定試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
亞硝酸鹽廣泛存在于水體和土壤中，不僅是有機氮分解的重要中間產物，也可能來自污染。人體攝入過量后，可誘發(fā)消化系統(tǒng)癌變。
測定原理：
在酸性條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸反應生成重氮化合物，再與N-1-萘基乙二胺形成紫紅色偶氮化合物，在540nm處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器：
天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，室溫保存。
試劑一：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。
樣品處理：
1. 土壤樣品：準確稱取過篩后的土壤約0.2g，加入1 mL 提取液，室溫震蕩1h，8000g，25℃離心15min，靜置，待其分層后，取上清液待測。
2. 水樣：直接檢測；如果渾濁，可以離心后再測定。
測定步驟和操作表：
1、 分光光度計/酶標儀預熱30min，調節(jié)波長至540nm，蒸餾水調零。
2、 操作表
測定管 | 空白管 | |
提取液（µL） | 70 | |
樣品（µL） | 70 | |
試劑一（µL） | 65 | 65 |
試劑二（µL） | 65 | 65 |
混勻，25℃靜置15min，于微量石英比色皿/96孔板中檢測540nm處吸光值A。 △A=A測定 - A空白 | ||
注意：空白管只需測定一次。
亞硝酸鹽含量計算：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線回歸方程為：y=0.234x + 0.0002，R2= 0. 999 x為標準品亞硝酸鈉濃度（μg/ml） y為吸光值A。
NO2-（μg/g）=（△A-0.0002）÷0.234×V樣÷（V樣÷V樣總×W）×0.6668
=（A – 0.086）÷0.234×1.5×0.6668÷W
=4.27×（△A-0.0002）÷W
V樣總：加入提取液體積，1.5 mL； V樣：反應中樣品體積，0.07mL；W：樣品質量，g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線回歸方程為：y=0.141x +0.095，R2= 0. 9991 x為標準品亞硝酸鈉濃度（μg/ml） y為吸光值A。
NO2-（μg/g ）=（△A-0.0002）÷0.141×V樣÷（V樣÷V樣總×W）×0.6668
=（△A-0.0002）÷0.141×1.5×0.6668÷W
=7.09×（△A-0.0002）÷W
V樣總：加入提取液體積，1.5 mL； V樣：反應中樣品體積，0.07mL；W：樣品質量，g。
注意事項：
1. 試劑盒2-8℃保存。
2. 試劑對人體有一定的危害，請穿實驗服，戴手套操作。
3. 若檢測出得OD值在標準曲線范圍外，請將樣品進行適當的濃縮或稀釋（A540 <0.09濃縮，A540 > 1.5 適當稀釋）。
4. Z低檢出限為0.5μg/g。
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