BCA法蛋白含量測定試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定
測定意義：
樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。
測定原理：
堿性條件下，蛋白質中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵，能將Cu2+還原成Cu+；2分子的BCA與Cu+結合，生成紫色絡合物，在540-595nm有吸收峰，562nm處吸收峰Z強。
自備儀器和用品：
臺式離心機、恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑A：液體25mL×1瓶，4℃保存。
試劑B：液體0.5mL×1支，4℃保存。
標準品：液體2mL×1支，4℃保存。
工作液配制：臨用前請根據擬用工作液體積（樣本數×0.2mL），將試劑A和B按照50：1的比例混合，蓋緊后充分混勻。
樣品中可溶性蛋白質提取：
1. 液體樣品：澄清液體樣品可以直接測定。
2. 組織樣品：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液（自備，根據需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水）
冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心10min，取上清，即待測液。
3. 細菌、細胞：按照細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000rpm，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
測定操作：
1. 可見分光光度計/酶標儀預熱30min，調節(jié)波長到562 nm，蒸餾水調零。
2. 工作液置于60℃水浴預熱30 min。
空白管 | 標準管 | 測定管 | |
蒸餾水（μL） | 4 | ||
標準品（μL） | 4 | ||
待測液（μL） | 4 | ||
工作液（μL） | 200 | 200 | 200 |
混勻后置于60℃保溫30min，于微量玻璃比色皿/96孔板，于562nm處測定吸光值A，分別記為A空白管、A標準管、A測定管。 | |||
注意：空白管和標準管只需要做一次。
計算公式：
Cpr (mg/mL)= C標準品×（A測定管－A空白管）÷（A標準管－A空白管）
=0.5×（A測定管－A空白管）÷（A標準管－A空白管）
Cpr (mg/g 鮮重)= C標準品×（A測定管－A空白管）÷（A標準管－A空白管）÷ W
=0.5×（A測定管－A空白管）÷（A標準管－A空白管）÷ W
W: 樣本質量，g
注意事項：
BCA法蛋白含量測定試劑盒，適用于測定蛋白濃度在20-5000μg/ml樣品。測定前取1-2個樣做預實驗，若A測定管－A空白管﹥1.5，需將樣本用提取液稀釋后再測定，以確保測定的準確性。
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