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          雞白介素-4(IL-4)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

          閱讀:916      發(fā)布時(shí)間:2023-03-08
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          雞白介素-4IL-4)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

          本試劑盒僅供研究使用。

           檢測范圍:                                                          96T

          3ng/L - 160ng/L

           

          使用目的:

          本試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白介素-4IL-4含量。

          實(shí)驗(yàn)原理

          本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中雞白介素-4IL-4水平。用純化的雞白介素-4IL-4抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白介素-4IL-4再與HRP標(biāo)記的白介素-4IL-4抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹di洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白介素-4IL-4呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中雞白介素-4IL-4濃度。

          試劑盒組成

          1

          30倍濃縮洗滌液

          20ml×1

          7

          終止液

          6ml×1

          2

          酶標(biāo)試劑

          6ml×1

          8

          標(biāo)準(zhǔn)品(320ng/L

          0.5ml×1

          3

          酶標(biāo)包被板

          12孔×8

          9

          標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          1.5ml×1

          4

          樣品稀釋液

          6ml×1

          10

          說明書

          1

          5

          顯色劑A

          6ml×1

          11

          封板膜

          2 

          6

          顯色劑B

          6ml×1/

          12

          密封袋

          1個(gè)

          標(biāo)本要求

          1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

          2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

          操作步驟

          1.         標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

          160ng/L

          5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

          150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          80ng/L

          4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

          150μl5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          40ng/L

          3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

          150μl4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          20ng/L

          2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

          150μl3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          10ng/L

          1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

          150μl2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

           

           

          2.         2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

           3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

           4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

           5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

           6.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

           7.         溫育:操作同3。

           8.         洗滌:操作同5

           9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

          10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

          11.     測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

          操作程序總結(jié):

          637986753047167909652.jpg

           

          計(jì)算

            以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。

          注意事項(xiàng)

          1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

          2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

          3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

          4.  請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

          5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

          6.底物請(qǐng)避光保存。

          7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

          8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

          9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

          保存條件及有效期

          1.試劑盒保存:2-8。

          2.有效期:6個(gè)月

          提供商

          優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司

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