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          鵝促性腺激素釋放激素(GnRH)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

          閱讀:924      發(fā)布時間:2023-03-07
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          鵝促性腺激素釋放激素(GnRH)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

          本試劑盒僅供研究使用。

          檢測范圍:                                                          96T

          5ng/L -160ng/L

           

          使用目的:

          本試劑盒用于測定鵝血清,血漿,細胞上清液樣本中促性腺激素釋放激素(GnRH含量。

          實驗原理

          本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中鵝促性腺激素釋放激素(GnRH水平。用純化的鵝促性腺激素釋放激素(GnRH抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入促性腺激素釋放激素(GnRH),再與HRP標記的促性腺激素釋放激素(GnRH抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹di洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促性腺激素釋放激素(GnRH呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中鵝促性腺激素釋放激素(GnRH濃度。

          試劑盒組成

          1

          30倍濃縮洗滌液

          20ml×1

          7

          終止液

          6ml×1

          2

          酶標試劑

          6ml×1

          8

          標準品(320ng/L

          0.5ml×1

          3

          酶標包被板

          12孔×8

          9

          標準品稀釋液

          1.5ml×1

          4

          樣品稀釋液

          6ml×1

          10

          說明書

          1

          5

          顯色劑A

          6ml×1

          11

          封板膜

          2 

          6

          顯色劑B

          6ml×1/

          12

          密封袋

          1

          標本要求

          1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

          2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

          操作步驟

          1.         標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

          160ng/L

          5號標準品

          150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

          80ng/L

          4號標準品

          150μl5號標準品加入150μl標準品稀釋液

          40ng/L

          3號標準品

          150μl4號標準品加入150μl標準品稀釋液

          20ng/L

          2號標準品

          150μl3號標準品加入150μl標準品稀釋液

          10ng/L

          1號標準品

          150μl2號標準品加入150μl標準品稀釋液

           

           

          2.        2.          加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

           3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

           4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

           5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

           6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

           7.         溫育:操作同3

           8.         洗滌:操作同5。

           9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

          10.       終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

          11.       測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

          操作程序總結:

          637986753047167909652.jpg

           

          計算

            以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

          注意事項

          1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

          2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

          3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

          4.  請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

          5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

                6.底物請避光保存。

                7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

           8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

                9.本試劑不同批號組分不得混用。


          保存條件及有效期

          1.試劑盒保存:2-8。

          2.有效期:6個月


          提供商

          優(yōu)利科(上海)生命科學有限公司

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          資料大小

          195.5KB

          資料類型

          WORD 文檔

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