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當(dāng)前位置:深圳市安培生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>共表達(dá)抗原的工作
抗原間的相互關(guān)系分為三種,分別是互斥關(guān)系、子代與親代的關(guān)系和共表達(dá)關(guān)系。
互斥關(guān)系是指兩種抗原不會同時表達(dá)在一中細(xì)胞上,即表達(dá)A不表達(dá)B,表達(dá)B不表達(dá)A。配色時,互斥的抗原是允許熒光溢漏的。
子代與親代關(guān)系是指抗原之間是上下級關(guān)系,即下級抗原是在上級抗原的基礎(chǔ)上進(jìn)行分析的。
共表達(dá)關(guān)系是指兩種抗原同時表達(dá)在一種細(xì)胞上。配色時,共表達(dá)抗原要搭配熒光干擾較小的熒光素,盡量避免熒光溢漏。
什么樣的抗原屬于共表達(dá)抗原呢?以Treg細(xì)胞為例,Treg細(xì)胞同時表達(dá)CD25和Foxp3,那么CD25和Foxp3就屬于共表達(dá)關(guān)系。在這種情況下,CD25和Foxp3需要搭配相互之間沒有溢漏的熒光素,比如搭配APC和PE,因為這兩個熒光素是幾乎沒有干擾的,因此可獲得預(yù)期的數(shù)據(jù)結(jié)果。
在多色流式實驗中,如果兩個共表達(dá)Marker使用的熒光染料之間干擾較嚴(yán)重,則會對圈門造成干擾,影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。雖然我們也能通過調(diào)節(jié)補(bǔ)償來減少光譜重疊的影響,但對被干擾通道熒光靈敏度降低的影響是無法通過后續(xù)的結(jié)果分析來消除的。
圖2. 熒光干擾的影響
如果共表達(dá)抗原之間有嚴(yán)重?zé)晒飧蓴_會怎么樣呢?那結(jié)果就可能出現(xiàn)如上圖右所示的情況,雖然進(jìn)行了補(bǔ)償調(diào)節(jié),但得到的目的細(xì)胞的比例跟實際有差別。
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