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三個常見小問題:
細胞培養(yǎng)用的培養(yǎng)基是不是必須加雙抗?血清在使用之前是不是一定要滅活?往培養(yǎng)基里加細胞因子又是什么操作?
要不要加雙抗?
在培養(yǎng)基中添加抗生素是一種常見的操作,其主要作用是抑制或殺死培養(yǎng)物中的某些細菌或真菌,從而避免它們對目標細胞的干擾和污染。
在培養(yǎng)實驗中,選擇適當濃度和種類的抗生素,可以有效地消除或減少雜菌、污染菌或其他不需要的微生物,保證培養(yǎng)物的純度和穩(wěn)定性。
同時,添加抗生素還可以用來篩選或檢測耐藥性菌株,評估其對抗生素的敏感性和耐受性。
但是,添加抗生素并不能確保你的細胞一定不被微生物污染,因操作不當造成污染的還是會被污染的。
并且,一旦細胞被污染,抗生素也只能起到一定的抑制延緩作用,并不能全部殺滅微生物。而且,長期添加抗生素的話,還容易掩蓋培養(yǎng)環(huán)境的真實情況。
因此 ,雖然在培養(yǎng)基中添加抗生素是常見操作,但并不是必須操作。
細胞因子是什么?
除了抗生素外,培養(yǎng)基中還可以添加細胞因子,以模擬體內(nèi)環(huán)境和調(diào)節(jié)細胞功能。
細胞因子是一類多肽分子或蛋白質(zhì),由細胞自身或其他細胞產(chǎn)生,并通過受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑影響目標細胞的增殖、分化、存活、遷移等過程。
在細胞培養(yǎng)中,添加適當濃度和種類的細胞因子,可以促進細胞增殖和分化,提高細胞存活率和功能表現(xiàn)。
例如,添加表皮生長因子(EGF)可以促進表皮細胞增殖和修復(fù);添加肝細胞生長因子(HGF)可以促進肝細胞增殖和再生;添加白細胞介素-2(IL-2)可以促進T淋巴細胞增殖和活化等。
此外,添加某些細胞因子還可以誘導(dǎo)干細胞分化為特定類型的成體細胞,如添加神經(jīng)營養(yǎng)因子(NGF)可以誘導(dǎo)干細胞分化為神經(jīng)元。
血清要滅活才能用?
血清中含有生長因子可促進細胞繁殖,含有附著因子可促進細胞貼壁,同時還有一種特殊的活性能抵抗胰蛋白酶的消化作用。
血清內(nèi)含有豐富的礦物質(zhì)、酯類和激素。最常見的血清包括:小牛血清、胎牛血清、成年馬血清等。其中胎牛血清對培養(yǎng)要求高的細胞系。
血清來源于動物, 因此必定存在批次間的差異,且生產(chǎn)過程中由于工藝流程的不同,哪怕是同一類型的血清也會存在質(zhì)量上的巨大差異。
血清的滅活是將血清置于56攝氏度中30分鐘,然后再分裝成數(shù)份保存于-20攝氏度。
血清加熱的最初目的是為了免疫分析時用于滅活補體的,因此就有了血清使用前要滅活的說法。
但現(xiàn)在商業(yè)化的血清產(chǎn)品,基本上出廠之前都經(jīng)過了滅活處理,所以一般情況下,就不需要再操作一次滅活了,除非供應(yīng)商在銷售時特別強調(diào)了要進行這個操作。
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