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        1. 深圳市安培生物科技有限公司
          中級會員 | 第4年

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          血清系列
          細胞轉染
          支原體清除
          細胞凍存
          實驗耗材
          分子試劑
          細胞增殖與凋亡
          Biozellen系列
          培養(yǎng)基
          ELISA試劑盒
          TOYOBO(東洋紡)
          ZYMO RESEARCH
          Greiner(格瑞納)
          IKA(艾卡)
          化學發(fā)光底物(ECL)
          PROSPEC系列
          Epigentek系列
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          細胞生物學
          Corning康寧
          解離試劑
          細胞類-實驗耗材
          原代細胞
          植物檢測系列試劑盒
          SERANA
          BSA
          細胞系
          生化試劑盒
          環(huán)境檢測系列試劑盒(AKEN)
          類器官培養(yǎng)
          緩沖器和解決方案
          生物三凝膠基質
          細胞因子分子
          生物樣本庫

          從有限的細胞中提取 RNA

          時間:2023/4/21閱讀:804
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          材料與儀器

          LCM 帽子
          乙醇 糖原 RNA 提取試劑盒 超純水
          移液器

          步驟

          一、材料

          1. 緩沖液、試劑和溶液

          75% 乙醇 (超純水配制)

          糖原,5 mg/ml(Ambion,Austin,TX)

          StratageneRNA 提取試劑盒(200345,StratageneCloningSystems,LaJolla,CA),

          包括變性溶液、飽和酚 (存于 4°C)、β-巰基乙醇 (存于 4°C)、氯仿:異戊醇、

          2mol/L 乙酸鈉、異丙醇?;蛘呤褂?PicoPureRNA 分離試劑盒(KIT0202,Arcturus,

          MountainView,CA)

          DEPC 處理的超純水 (BiotecxLaboratories,Houston,TX)(4°C 儲存)

          2. 特殊設備

          移液器

          無 RNA 酶的 1.5 ml 管子

          3. 細胞和組織

          來自方案 3 的 LCM 帽子

          二、方法

          1. 加入 200ul 變性溶液和 1.6ulβ-巰基乙醇到 0.5 ml 管子中。

          2. 將 LCM 帽子插入管子,渦旋 5s。

          3. 倒置管子孵育 5 min。

          4. 移去 LCM 帽子。這一步獲得的樣品可以在-80°C 保存 6 個月。

          5. 將溶液轉移到 1.5 ml 管子中。

          6. 加入 2ul2mol/L 的乙酸鈉,溫和混勻。

          7. 加入 220ul 水飽和的酚(底層),溫和混勻。

          8. 加入 60ul 氯仿:異戊醇,劇烈晃動。

          9. 放于冰上 15 min。

          10.14000r/min4°C 離心 30 min。

          11. 吸上層溶液到新管子中。

          12. 加入 2ul 糖原(最終濃度 10~150ug/ml)。

          13. 加入 200ul 冷異丙醇。

          14.-80°C 過夜。


          深圳安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術實力、壹流的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)??偛吭O在廣東,服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學的發(fā)展提供壹流的產品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經(jīng)科學等領域的產品供應線,在各個領域內向用戶提供世界前沿水平和質量穩(wěn)定的產品,安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等優(yōu)質客戶提供優(yōu)質的產品、技術支持與服務。


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