凡是都有規(guī)律可循。如果你文獻(xiàn)看的沒(méi)有那么多，腦洞未開(kāi)，下面的保守方法可以適合你進(jìn)行初步的嘗試。但是要提醒小伙伴們不時(shí)的追蹤一下文獻(xiàn)研究進(jìn)展，更多的時(shí)候不是為了知道某個(gè)分子或者某個(gè)領(lǐng)域研究的最新情況，這些對(duì)于基層科研人員的意義并不是很大；而是為了發(fā)散自己的思維，提煉別人的研究設(shè)計(jì)思路！

下面這幾步，對(duì)于剛剛上手實(shí)驗(yàn)的小伙伴來(lái)說(shuō)，應(yīng)該有所幫助。

1.確定 A 研究的價(jià)值，即臨床組織樣本/相關(guān)細(xì)胞系中有沒(méi)有差異性表達(dá)

腫瘤組織樣本	→ ↘	分析A在臨床組織中的表達(dá)是否與腫瘤進(jìn)展程度或者例如大小、轉(zhuǎn)移灶、預(yù)后等相關(guān)
	→ ↘
腫瘤細(xì)胞系	→	分析A在臨床癌組織、腫瘤細(xì)胞系中的表達(dá)對(duì)比癌旁組織和正常細(xì)胞系是否差異表達(dá)

2. 確定 A 能夠?qū)δ骋患?xì)胞表型產(chǎn)生一定的影響

shRNA慢病毒干擾載體	↘ → → ↗	可能用到的載體手段	敲除/過(guò)表達(dá)A	↗ → → → ↘	細(xì)胞增殖
過(guò)表達(dá)載體					細(xì)胞凋亡
突變載體					細(xì)胞周期
敲除載體					細(xì)胞運(yùn)動(dòng)
					細(xì)胞侵襲

3. 確定 A 能夠?qū)π∈蟮哪[瘤形成的作用是否與上一步較為一致。

選擇動(dòng)物模型進(jìn)行功能驗(yàn)證，一般選擇裸鼠進(jìn)行成瘤實(shí)驗(yàn)

裸鼠種植瘤需注意：

●腫瘤細(xì)胞的狀態(tài)

●細(xì)胞的數(shù)量：每只注射2×106－107

●裸鼠的選擇：5-8周齡

●種植部位：血供豐富區(qū)域，如腋窩中后部、腹股溝中上部。

4. 找出 A 的作用機(jī)制

Microarray/pathway array/相關(guān)芯片分析A影響下游基因的mRNA/通路/蛋白表達(dá)變化

qRT-PRC、Western blot 驗(yàn)證

驗(yàn)證A調(diào)控B/C/D的特異性

▍

結(jié)合增殖、周期、凋亡、遷移和侵襲等表型

另外還可以同步研究一下 A 本身是否受到甲基化或者乙?；缺碛^遺傳調(diào)控。

這樣是否簡(jiǎn)單易懂呢？小伙伴們不妨針對(duì)自己的某基因研究，做出一個(gè)類似的技術(shù)路線圖，做完一步劃掉一步。那些表型也不是都做的，要看文獻(xiàn)或者自己分析一下你研究的基因 A 是否跟一些例如增殖相關(guān)基因或者周期相關(guān)基因等有聯(lián)系，或者涉及到某些明星通路等。

以上為常規(guī)手段，可為基礎(chǔ)薄弱的小伙伴尋求大方向。如果想要高大上的研究設(shè)計(jì)，每步還請(qǐng)自行查閱文獻(xiàn)加以創(chuàng)新。

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