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l 細(xì)胞鑒定

STR鑒定已通過

l 細(xì)胞來源

國(guó)家資源庫(kù)

l 細(xì)胞背景

1976年R. Cailleau等從一位48歲白人女性腫瘤轉(zhuǎn)移患者胸水中建立了MDA-MB-453細(xì)胞株，其它轉(zhuǎn)移灶包括淋巴結(jié)，腦和胸水及心包腔積水。該細(xì)胞過表達(dá)FGF受體。

l 細(xì)胞特性

1） 來源：乳腺；源自轉(zhuǎn)移灶：心包積液

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，混合生長(zhǎng)，貼壁與懸浮細(xì)胞同時(shí)存在。

3） 含量：>1x106  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用。

l 培養(yǎng)條件：

1） 準(zhǔn)備L15（推薦awcell-0009）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件：氣相：空氣，100%；該細(xì)胞培養(yǎng)不能通入CO2， 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項(xiàng)：

注意事項(xiàng)：

a. 無CO2培養(yǎng)。如果沒有條件準(zhǔn)備空氣氣相100%的培養(yǎng)箱的，可以采用不透氣密封蓋的T25培養(yǎng)瓶來培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中每天將細(xì)胞拿出培養(yǎng)箱換1-2次空氣。

b. 細(xì)胞形態(tài)是貼壁生長(zhǎng)及懸浮生長(zhǎng)混合，貼壁細(xì)胞形態(tài)是上皮樣（立方形或多邊形），但也有一些單個(gè)或成團(tuán)的懸浮細(xì)胞。

c. 細(xì)胞復(fù)蘇后一段時(shí)間內(nèi)，貼壁不牢，大部分細(xì)胞呈懸浮狀態(tài)，懸浮細(xì)胞不要丟棄，換液或傳代時(shí)可以將懸浮細(xì)胞收集離心后，重新加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)。

該細(xì)胞為輕微貼壁和懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，傳代可以參考以下方法：

1. 收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤(rùn)洗后細(xì)胞會(huì)脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3. 將收集到的懸浮細(xì)胞、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3） 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

l 運(yùn)輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

常溫（2） T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。