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l 細胞鑒定

STR鑒定已通過

l 細胞來源

國家資源庫

l 細胞特性

1） 來源：黑素細胞，黑素瘤 以前認為是乳腺; 乳房; 導(dǎo)管; 導(dǎo)管癌; 胸腺滲出液

2） 形態(tài)：紡錘形 貼壁生長

3） 含量：>1x106  細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

l 培養(yǎng)條件：

1）準備L15 基礎(chǔ)培養(yǎng)基            （awcell-0009）            89%

   優(yōu)質(zhì)胎牛血清                  （awcell-0500）            10%

   P/S青霉素-鏈霉素             （awcell-15140-122）         1%

   牛胰島素                      （awcell-0016-a）           0.01mg/ml

   谷胱甘肽（還原型）             （awcell-8180）            0.01mg/ml

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，100%；

l 注意事項：

注意事項：

該細胞培養(yǎng)不能通入CO2，如果沒有條件準備空氣氣相100%的培養(yǎng)箱的，可以采用不透氣密封蓋的T25培養(yǎng)瓶來培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中每天將細胞拿出培養(yǎng)箱換1-2次空氣。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

4）運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

l 運輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

常溫（2） T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。