目錄:上海安為生物科技有限公司>>細(xì)胞系/細(xì)胞株>>人源細(xì)胞系>> MCF-7/ADR人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞MCF-7/adr
應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
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MCF-7/adr 人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株
【MCF-7 adr; MCF-7/ADR; OVCAR-8/ADR】 | |
l 細(xì)胞鑒定 | STR鑒定已通過 |
l 細(xì)胞來源 | 國家資源庫 |
l 細(xì)胞背景 | 有問題的細(xì)胞系:被污染。顯示為 OVCAR-8 衍生物(PubMed= 16504380;PubMed= 20143388)。最初被認(rèn)為是 MCF-7 的衍生物。 |
l 培養(yǎng)條件: | 1)準(zhǔn)備1640 基礎(chǔ)培養(yǎng)基(推薦:awcell-0002) ,優(yōu)質(zhì)胎牛血清 10%,P/S青霉素-鏈霉素 1%,500ng/mL ADR。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 |
l 注意事項(xiàng):
| 注意:培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)液是不含藥物的,待細(xì)胞長到70-80%匯合度時,去掉培養(yǎng)液,加含400ng/ml阿霉素藥物的培養(yǎng)液,放入培養(yǎng)箱,這段時間會有少部分細(xì)胞懸浮起來,屬于正常情況,通過換液可以去掉,等細(xì)胞長滿就可以消化傳代了,這時可以一直用含藥物培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,兩代之后就可以將藥物濃度提高到500ng/ml,細(xì)胞凍存時不要在培養(yǎng)基中加藥物。 1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。 2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。 3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。 4)運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。 |
l 運(yùn)輸形式: | 低溫:(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。 常溫(2) T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。 |
l 生物安全 | 1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意:凍存管浸沒在液氮中會泄漏,并會慢慢充滿液氮。解凍時,液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。 |
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