之前我們有幾期文章介紹了使用默克Amicon^® Ultra超濾管的應(yīng)用場(chǎng)景（分離外泌體、濃縮病毒），有很多老師反饋了一些超濾管使用時(shí)的問(wèn)題，針對(duì)其中問(wèn)的比較多的問(wèn)題，小編特意進(jìn)行了收集、整理。今天給大家介紹超濾管的使用過(guò)程中，離心力g與RPM的換算及常見問(wèn)題的解答。

從離心機(jī)廠家文件上查閱轉(zhuǎn)子半徑，或像以下圖示這樣自己測(cè)量轉(zhuǎn)子半徑。

繪制轉(zhuǎn)子半徑和建議的RCF（離心力g）圖，連線確定RPM。

此列線圖實(shí)際是通過(guò)右側(cè)的公式計(jì)算得出的。

A1：Amicon^® Ultra超濾管的膜材質(zhì)為默克密理博Ultracel^®再生纖維素膜，生產(chǎn)工藝嚴(yán)格，截留分子量明確而精準(zhǔn)，蛋白吸附損失最小。

Q2：如果要用超濾的方法分離兩種蛋白，那么這兩個(gè)蛋白的大小需要相差多少？

A2：按照經(jīng)驗(yàn)，建議兩個(gè)蛋白的分子量要相差一個(gè)數(shù)量級(jí)（10倍）。

Q3：Amicon^® Ultra超濾管可以用于病毒濃縮么？

A3：可以。對(duì)于慢病毒推薦Amicon^® Ultra 100 kDa； 對(duì)于腺病毒推薦Amicon^® Ultra 50kDa。具體的操作步驟可以參考病毒濃縮純化試劑盒FTLV00003和FTAV00003的產(chǎn)品使用說(shuō)明書。另提供AAV（腺相關(guān)病毒）的制備方法供參考。

Q4： Amicon^® Ultrar超濾管可以用酒精消毒滅菌么？

A4：Amicon^® Ultra與70%乙醇是兼容的，但是對(duì)滅菌處理的具體方法沒(méi)有做相關(guān)的測(cè)試，所以無(wú)法提供更進(jìn)一步的參考信息。建議采用Ultrafree無(wú)菌離心管對(duì)濃縮后的樣品進(jìn)行過(guò)濾除菌。

Q5：Amicon^® Ultra超濾裝置是否可以用于高壓滅菌？

A5：Amicon^® Ultra都是采用熱封設(shè)計(jì)，不可以用高壓高溫滅菌。

Q6：Amicon^® Ultra超濾管是否不含RNA酶？

A6：不保證超濾管不含RNA酶，建議用0.1% DEPC在37度浸泡2h，以滅活RNA酶；殘留的DEPC可以用Milli-Q^®超純水洗滌除去。

Q7：用Amicon^® Ultra超濾管去除去污劑是有什么需要注意的嗎？

A7：去污劑因其性質(zhì)，當(dāng)濃度大于臨界微團(tuán)濃度（Critical Micelle Concentration, CMC）時(shí)，去污劑分子會(huì)聚集形成微團(tuán)而改變分子構(gòu)象，這有可能會(huì)影響去污劑的去除效果。

Q8：蛋白在濃縮時(shí)出現(xiàn)了沉淀，如何改進(jìn)？

A8：蛋白如果濃縮過(guò)快或者過(guò)度濃縮都有可能引起蛋白沉淀。建議蛋白濃縮后的最終濃度不超過(guò)20mg/ml。對(duì)于對(duì)濃縮速度敏感而容易沉淀的蛋白，建議的改進(jìn)方法是：

Q9：有時(shí)候用超濾離心管連水都離不下來(lái)，可能是什么原因？

A9： Amicon^® Ultra超濾膜中含有微量甘油。 如果出現(xiàn)這種情況，請(qǐng)先用0.1N NaOH清洗再離心。最后用緩沖液或Milli-Q^®水再次清洗后甩干。清洗后的濾膜應(yīng)立即使用，如暫時(shí)不用，請(qǐng)保持潤(rùn)濕狀態(tài)，避免重新干燥。

Q10：說(shuō)明書中推薦在室溫下進(jìn)行離心，考慮到蛋白的穩(wěn)定性，是否可以在4℃進(jìn)行離心？
A10：可以，但是低溫會(huì)增加蛋白樣品的粘性，導(dǎo)致流速減慢，建議可將離心時(shí)間延長(zhǎng)到原來(lái)的1.5倍。