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3T6-Swiss albino小鼠胚胎成纖維細(xì)胞系

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二、細(xì)胞培養(yǎng)操作說明

1.細(xì)胞培養(yǎng)需要充足經(jīng)驗，新手或者沒有類似細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗的人建議在專業(yè)人士指導(dǎo)下進行操作，尤其注意無菌操作、貼壁細(xì)胞消化時間及細(xì)胞培養(yǎng)密度。

2.部分細(xì)胞在傳代后時，會有以下現(xiàn)象：細(xì)胞內(nèi)會有黑色小點、細(xì)胞間隙有些顆粒物、培養(yǎng)基漂浮一些死細(xì)胞。以上都是細(xì)胞培養(yǎng)常見現(xiàn)象，不影響細(xì)胞增殖和實驗。

3.細(xì)胞內(nèi)的黑色顆粒是細(xì)胞外分泌泡、細(xì)胞器折光或者細(xì)胞膜表面物質(zhì)，這個屬于細(xì)胞自身特性，無法清除也無法改變，具體情況可以參考ATCC、DSMZ等大型細(xì)胞庫細(xì)胞照片。細(xì)胞外的黑色顆粒大部分是細(xì)胞碎片，可以吸走培養(yǎng)基后用PBS潤洗；潤洗不能清除的可以消化細(xì)胞重新接種，消化完成后加*培養(yǎng)基終止消化，混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細(xì)胞，再離心后，用*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。

4.不同品牌胰M溶液成分不一樣，消化活性差別比較大，更換胰M品牌時需重新摸索消化時間，以消化到細(xì)胞間隙變大但未漂浮為準(zhǔn)，此時結(jié)束消化最佳，避免消化過度導(dǎo)致細(xì)胞死亡。細(xì)胞消化后比較脆弱，吹打力度不要過大，不要產(chǎn)生過多氣泡，否則會嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài)。

5.不同細(xì)胞生長速度差異較大，所有細(xì)胞收貨后第①次傳代建議按1:2傳代。正常培養(yǎng)時生長較慢、密度較低的細(xì)胞需要傳代時按1:2傳代，生長較快、密度較高的細(xì)胞可以按1:4傳代。

6.細(xì)胞生長偏慢時，可以將血清濃度增加到15-20%培養(yǎng)一段時間，待細(xì)胞狀態(tài)和生長速度恢復(fù)正常后換回10%血清。