血液/細(xì)胞/組織基因組 DNA 提取試劑盒（離心柱型）

產(chǎn)品貨號(hào)：26151

 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：本試劑盒采用可以特異性結(jié)合 DNA 的離心吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng)，提取多種細(xì)胞中的基因 DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司*新型材料，高效、專一吸附 DNA，可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。提取的基因組 DNA 片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒回收的 DNA 可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建、 Southern 雜交等實(shí)驗(yàn)。

 包裝清單：產(chǎn)品名稱 50 次 200 次緩沖液 GA（Buffer GA） 15 ml 50 ml緩沖液 GB（Buffer GB） 15 ml 50 ml緩沖液 GD（Buffer GD） 13 ml 52 ml漂洗液 PW（Buffer PW） 15 ml 50 ml洗脫緩沖液 TE（Buffer TE） 15 ml 60 mlProteinase K 1 ml 4×1 ml吸附柱 CB3 （Spin Columns CB3） 50 個(gè) 200 個(gè)收集管（2 ml）（Collection Tubes 2 ml） 50 個(gè) 200 個(gè)選配試劑：紅細(xì)胞裂解液(Red Cell Lysis Buffer 目錄號(hào)：T16121)；RNase A（100 mg/ml）。 

儲(chǔ)存條件：該試劑盒置于室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存 12 個(gè)月，更長(zhǎng)時(shí)間的保存可置于 2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時(shí)間，必要時(shí)可在 37℃水浴中預(yù)熱 10 min，以溶解沉淀。 

提取得率：材料 提取量 DNA 得量哺乳動(dòng)物全血 100-400 μl 3-10 μg禽類、兩棲類全血 5-20 μl 5-40 μg動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液 106 -107 cells 5-30 μg動(dòng)物組織 30 mg 10-30 μg產(chǎn)品特點(diǎn)：簡(jiǎn)單快速：1 h 內(nèi)即可獲得超純的基因組 DNA。廣 泛：適用于血液、多種動(dòng)物細(xì)胞和動(dòng)物組織等。超 純：獲得的 DNA 純度高，可直接用于 PCR、酶切、雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。操作步驟：使用前請(qǐng)先在緩沖液 GD 和漂洗液 PW 中加入無水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。

 1.處理材料a.如提取材料為血液，可直接使用 200 μl 新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液，不足 200 μl 可加緩沖液 GA 補(bǔ)足。 

注意：如需處理更大體積血液，如 300 μl-1 ml，應(yīng)按以下步驟操作：在樣品中加入 3 倍體積紅細(xì)胞裂解液（例如，300 μl 血液加入 900 μl 紅細(xì)胞裂解液），顛倒混勻，室溫放置 5 min，期間再顛倒混勻幾次。10000 rpm（~11,500×g）離心 1 min（若離心機(jī)最高轉(zhuǎn)速不允許，可 3000 rpm（~3,400×g）離心 5 min），吸去上清，留下白細(xì)胞沉淀，加 200 μl 緩沖液 GA，振蕩至*混勻。紅細(xì)胞裂解液本公司另外有售（目錄號(hào)：T16121）。b.如果處理血樣為禽類、鳥類、兩棲類或更低級(jí)生物的抗凝血液，其紅細(xì)胞為有核細(xì)胞，因此處理量 5-20 μl，可加緩沖液 GA 補(bǔ)足 200 μl 后進(jìn)行下面的裂解步驟。c.貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)先處理為細(xì)胞懸液，然后 10,000 rpm（~11,200×g）離心 1 min，倒盡上清，加 200 μl緩沖液 GA，振蕩至*懸浮。d.動(dòng)物組織（脾組織用量應(yīng)少 10 mg）應(yīng)先打碎處理為細(xì)胞懸液，然后 10,000rpm（~11,200×g）離心 1 min，倒盡上清，加 200 μl 緩沖液 GA，振蕩至*懸浮。注意：如果需要去除 RNA，可加入 4 μl RNaseA（100 mg/ml）溶液（客戶自備，目錄號(hào)：R42462），振蕩15 sec，室溫放置 5 min。

 2.加入 20 μl Proteinase K 溶液，混勻。a.提取血液基因組時(shí)，只需加入 Proteinase K 混勻，即可繼續(xù)進(jìn)行下一步。b.提取細(xì)胞基因組時(shí)，只需加入 Proteinase K 混勻，即可繼續(xù)進(jìn)行下一步。c.提取組織基因組時(shí)，加入 Proteinase K 混勻后，在 56℃放置，直至組織溶解，簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠，再進(jìn)行下一步驟。注意：不同組織裂解時(shí)間不同，通常需 1-3 h 即可完成（鼠尾需要消化過夜）。不會(huì)影響后續(xù)操作。每小時(shí)顛倒混合樣品 2-3 次，用水浴振蕩器也可。 

3.加入 200 μl 緩沖液 GB，充分顛倒混勻，70℃放置 10 min，溶液應(yīng)變清亮，簡(jiǎn)短離心以去 除管蓋內(nèi)壁的水珠。注意：加入緩沖液 GB 時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，一般 70℃放置時(shí)會(huì)消失，不會(huì)影響后續(xù)實(shí) 驗(yàn)。如溶液未變清亮，說明細(xì)胞裂解不*，可能導(dǎo)致提取 DNA 量少和提取出的 DNA 不純。當(dāng)血液體積≤200 μl 且沒有采用紅細(xì)胞裂解處理，或是樣本儲(chǔ)存條件不佳，水浴后顏 色可能為深褐色，注意溶液中沒有團(tuán)塊等沉淀。

 4.加人 200 μl 無水乙醇，充分振蕩混勻 15 sec，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。 

5.將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個(gè)吸附柱 CB3 中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱 CB3 放回收集管中。 

6.向吸附柱CB3中加入500 μl緩沖液GD（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱 CB3 放入收集管中。

 7.向吸附柱 CB3 中加入 600 μl 漂洗液 PW（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱 CB3 放入收集管中。

 8.重復(fù)操作步驟 7。

 9.將吸附柱 CB3 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 min，倒掉廢液。將吸附柱 CB3 置于室溫放置數(shù)分鐘，以*晾干吸附材料中殘余的漂洗液。

注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù) 的酶反應(yīng)（酶切、PCR 等）實(shí)驗(yàn)。

 10.將吸附柱 CB3 轉(zhuǎn)入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加 50-200 μl 洗脫緩 沖液 TE，室溫放置 2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)離心 2 min，將溶液收集到離心管 中。

 注意：洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于 50 μl，體積過小影響回收效率。洗脫液的 pH 值對(duì)于洗 脫效率有很大影響。若用 ddH2O 做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 7.0-8.5 范圍內(nèi)，pH 值低于 7.0 會(huì)降低洗脫效率；且 DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防 DNA 降解。為增加基因組 DNA 的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱 CB3 中，室溫放置 2 min，12,000 rpm（~13,400×g）離心 2 min。

 注意事項(xiàng) ：請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。

 1.第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明先在緩沖液 GD 和漂洗液 PW 中加入無水乙醇。

 2.樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的 DNA 片段較小且提取量也下降。

 3.若緩沖液 GA 或 GB 中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解，搖勻后使用。

 4.所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)，室溫下離心。