磷酸化蛋白提取試劑盒 

產(chǎn)品貨號(hào)：15231 

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 

磷酸化蛋白提取試劑盒用于哺乳動(dòng)物組織和細(xì)胞中提取胞質(zhì)蛋白，試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑，作用較為強(qiáng)烈，可獲得總蛋白，可用于免疫印跡實(shí)驗(yàn)等基礎(chǔ)研究實(shí)驗(yàn)，由于含有上述的酶抑制劑，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。

本品僅用于科研。

 產(chǎn)品組成： 

                              試劑名稱(chēng)                            50T               100T                 保存條件 

                                 裂解液                            50mL            100mL                  2~8℃ 

                      磷酸酶抑制劑（100×）              0.5mL            1mL                      -20℃

                      蛋白酶抑制劑（100×）              0.5mL            1mL                      -20℃

                           PMSF（100×）                    0.5mL            1mL                      -20℃ 

 操作步驟：

 在 1mL 的冷裂解液中各加入 10µL 的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和 PMSF；混勻，放置在冰上備用； 

1. 組織總蛋白的提取

   1) 稱(chēng)取 0.1g 的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然后加入 0.5-1mL的新配置的裂解液，研磨直至沒(méi)有明顯的組織塊，這個(gè)過(guò)程注意冰上操作；

   2) 將組織勻漿液移入 1.5mL 的 EP 管中，4℃12000g 離心 30min；

   3) 吸取上清至新的管中；

   4) 進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。（提取好的蛋白建議保存于-80℃，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。）

   2. 細(xì)胞總蛋白的提取

   1) 裂解液的用量：107個(gè)細(xì)胞需要裂解液 1mL

   2) 貼壁細(xì)胞：棄去培養(yǎng)基，用冷的 PBS 洗兩次，棄去 PBS，然后加入計(jì)算好的細(xì)胞裂解液；在冰上用細(xì)胞刮刀進(jìn)行刮離細(xì)胞，將刮離的細(xì)胞裂解液移入 EP 管中，顛倒裂解 20-30min。

   3) 懸浮細(xì)胞：4℃400g 離心收集細(xì)胞，用冷的 PBS 洗兩次細(xì)胞，同樣按細(xì)胞數(shù)加入裂解液，渦旋 10s，放置冰上裂解 10min，重復(fù) 3-4 次；

   4) 裂解完畢之后，將細(xì)胞裂解液 4℃12000g 離心 30min；

   5) 將上清移入新的 EP 管中；進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。（提取好的蛋白建議保存于-80℃，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。）

   注意事項(xiàng)：

   1. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程，所有試劑都要需要預(yù)冷或者即融，保證操作過(guò)程中的低溫環(huán)境。

   2. PSMF（有毒）現(xiàn)用現(xiàn)加，因?yàn)?PMSF 在水溶液中會(huì)快速降解。

   有效期：12 個(gè)月有效。