雙縮脲總蛋白試劑

產品貨號：T15260

產品規(guī)格：100ml/500ml

產品簡介：

雙縮脲是一種用于分析蛋白質的方法，雙縮脲反應的原理是在呈藍色的堿性硫酸銅溶液存在的情況下，銅離子與肽鍵形成有色螯合的銅復合物，呈紫色。所產生的顏色密度與參與反應肽鍵數成比例?？赏ㄟ^比色法分析濃度，在紫外可見光譜中的波長為540nm。雙縮脲法測定蛋白濃度兼容性亦很好，不受大部分樣本中其他成分的影響，但易受銅離子螯合劑影響，另外，對于血清總蛋白的雙縮脲分析，膽紅素、脂類、血紅蛋白、葡聚糖具有一定干擾作用。

尚寶生物 雙縮脲總蛋白試劑由硫酸銅、酒石酸鉀鈉、氫氧化鈉等組成，在10～160mg/ml濃度范圍內有較好的線性關系，是對蛋白質的精確定量分析試劑。

產品組成：

自備材料：

• 分光光度計或酶標儀
• 96孔板或離心管

雙縮脲總蛋白試劑操作步驟(僅供參考)：

• 取1ml蛋白標準配制液或稀釋液加入到蛋白標準(BSA)中，充分溶 解后配制成160mg/ml的蛋白標準溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白標準溶液應-20℃保存。

特別提示：待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中。例如待測蛋白溶解于蔗糖中，亦取蛋白標準溶解于蔗糖中。一般也可以用0.9%NaCl或PBS作為溶解BSA稀釋液。

• 將標準品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的標準品孔，加稀釋液補足至20μl。
• 加適當體積待測蛋白樣本到96孔板的樣品孔中。如果標準品稀釋液與溶解待測蛋白樣本的溶液不同，應在待測蛋白樣本孔中加入20μl稀釋液；如果標準品稀釋液與溶解待測蛋白樣本的溶液相同，無需在待測蛋白樣本孔中加入 20μl 稀釋液。
• 各孔加入200μl 雙縮脲總蛋白試劑, 室溫放置10～15min。
• 測定540nm波長處的吸光值，如無540nm，520～562nm之間的波長也可。
• 根據標準曲線計算出樣品的蛋白濃度。

注意事項：

• 待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測蛋白與蛋白標準中所含非蛋白成分不一致，有可能導致測定不準確。
• 待測蛋白和蛋白標準加入雙縮脲試劑后，如果發(fā)現檢測效果不佳，可以室溫放置1h或60℃放置15min，顏色會隨著時間的延長不斷加深。顯色反應也會隨溫度升高而加快。如果濃度較低，可以適當延長孵育時間或在較高溫度下孵育。

• 測定標準曲線時發(fā)現隨著標準品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯發(fā)化，可能的原因是樣品中含有銅離子螯合劑。
• 建議每次測定時都做標準曲線。因為顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應的速度和溫度有關，所以除非精確控制顯色反應的時間和溫度，否則如需精確測定宜每次都做標準曲線。
• 如果沒有酶標儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但應考慮根據比色皿的最小檢測體積。應按比例適當加大雙縮脲試劑的用量使總體積不小于最小檢測體積，樣品和標準品的用量亦相應按比例放大。使用分光光度計測定蛋白濃度時，每個試劑盒可以測定的樣品數量可能會顯著減少。
• 檢測中出現所有孔都呈暗紫色，可能原因是樣品含有還原劑，應適當透析或稀釋樣品。
• 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：12個月有效。